JPH0328199B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 【産業上の利用分野】

本発明は、血液、リンパ液、尿等の体液中に含
まれている病理学的成分を検査する際に利用され
る体液成分検査用試験片に関する。

【従来の技術】

血液、リンパ液、尿等の体液中に含まれている
病理学的成分を検査することは、疾病の診断や健
康管理等において欠かすことの出来ないことであ
る。 前記病理学的成分を検査する方法として、判定
用の錠剤を利用する方法と、試験片を利用する方
法とがあり、検査の際の操作が簡単で、しかも、
判定に要する時間が短時間で済む等の理由によ
り、現在では、試験片を利用する病理学的成分の
検査方法が主流をなしつつある。 しかして、前記病理学的成分を検査するための
従来の試験片は、体液中の目的とされる含有成分
を試薬との間の化学反応による色調の変化を利用
するものであつたが、近年、生理活性物質である
酵素を利用する検査方法が、強酸、強アルカリ等
を使用する必要がなく、比較的緩やかな条件の下
で体液中の病理学的成分を検査できるという理由
で、多く利用されるようになつている。 例えば、特公昭45−1878号公報には、吸湿性材
料に対して、液体の酵素と、過酸化反応の働きを
有する物質と、緩衝剤と、オルトトリジンジヒド
ロ塩化物と、ポリビニルピロリドン等の共重合体
類と、界面活性剤とからなる液体混合物を含浸さ
ることによつて得られるブドウ糖検出試験片が説
明されている。 前記従来の試験片は、被検査目的物質の含有量
に応じて検査試薬層部分が色調変化するように、
水・アルコール系の混合溶液に酵素と指示薬等と
を溶解させた溶液を、瀘紙等の吸湿性材料に多段
階的に含浸させた後、得られた含浸紙を適当な大
きさに切断し、これを試験用基体に粘着させるこ
とによつて作製されている。

【発明が解決しようとする課題】

ところで、前記従来の酵素を利用する試験片に
おいては、該試験片を得る工程中において、水・
アルコール系の混合溶液に溶解している酵素が不
安定であり、時間の経過によつて急速に変質する
ため、含浸用の溶液を調整後に直ちに吸湿性材料
に多段階含浸させなければならなく、その製造工
程が煩雑であり、また、良好な試験精度を有する
信頼性のある試験片を得るためには、特別な熟練
を要する等の欠点がある。 これに対して、本発明の体液成分検査用試験片
は、検査区域層の形成に際してインキ組成物が利
用されているので、試験精度が良くしかも品質が
一定した信頼性のある試験片を極めて容易に得る
ことのできる体液成分検査用試験片を提供する。

【課題を解決するための手段】

本発明の体液成分検査用試験片は、試験片用基
体と該試験片用基体の表面に形成されている検査
区域層とを有するもので、前記検査区域層が、酵
素と指示薬と結合剤と吸水性の微粒子とを有機溶
媒中に分散、混練させたインキ組成物の印刷また
は塗布、乾燥によつて形成されている。 前記構成からなる本発明の体液成分検査用試験
片の検査区域層の形成に利用される成分につい
て、以下に説明する。 酵 素 体液中に含有される病理学的成分、例えば、グ
ルコース、コレステロール、尿素、中性脂肪、リ
ン脂質、アンモニア、乳酸、ピルビン酸、シアル
酸、GPT、GOT、コリホンエステラーゼ、ロイ
シンアミノペプチターゼ、アミラーゼ、LCAT、
クレンアチホスキナーゼ等と反応し、指示薬に色
調変化を生ずるもの、あるいは、前記反応によつ
て生成する物質が、更に別の酵素と反応し、指示
薬に色調変化を生ずるもの等が利用される。 指示薬 前述の酵素が病理学的成分と共に作用し、その
色調が変化するものが利用される。 なお、酵素および指示薬は、病理学的成分検出
用として知られている多くの組み合わせの中か
ら、適宜選択して利用され、例えば、グルコース
検出用としては、 酵素……
グルコースオキシダーゼペルオキシダーゼ 指示薬…… ベンジジン系 が利用され、グルコースオキシダーゼがグルコー
スを酸化し、同時に生じた過酸化水素がペルオキ
シダーゼの存在下にベンジジン系の指示薬を変色
させることによつて、グルコースの検出が行なわ
れる。 また、尿酸検出用としては、ウリカーゼを作用
させ、生成する過酸化水素を同様にクロモゲンを
配した反応系で発色させることによつて、尿酸の
検出が行なわれる。 さらに、コレステロール検出用としては、コレ
ステロールオキシダーゼを作用させ、生成する過
酸化水素にクロモゲンを配した反応系で発色させ
ることによつて、コレステロールの検出が行なわ
れる。 結合剤 結合剤は、酵素および指示薬を試験片用基体の
表面にパターン化して固着させ、かつ、試験片用
基体の表面に固着されている酵素および指示薬が
被検査液中に溶出するのを防止するものであつ
て、特に、前述の体液中に含有される病理学的成
分並びに酵素および指示薬等に影響を及ぼすこと
がなく、また、体液検査を妨げることのないもの
が利用されることは勿論である。 結合剤については、前記した条件を満足するも
のであるか否かをその都度チエツクして使用する
ことが望ましいが、本発明者らの実験では、例え
ば、ポリアクリル酸エステルポリ、フエニルアセ
タール、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミ
ド、ポリウレタン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレ
ン、マレイン酸共重合体類、ポリ酢酸ビニル、ポ
リビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等の
合成高分子、メチルセルロース、エチルセルロー
ス、プロピルセルロース等のセルロース誘導体や
澱粉エーテル等の半合成高分子、澱粉、カゼイ
ン、多糖類等の天然高分子等が利用し得る。 なかでも、イソブチレン−無水マレイン酸共重
合体やスチレン−マレイン酸共重合体等のマレイ
ン酸共重合体を結合剤として利用する場合には、
該結合剤の良好な保形性能と、液体の良好な浸透
性とが得られるので、好都合である。 吸水性の微粒子 吸水性の微粒子は、試験片用基体の表面に形成
されている検査区域層の吸水性および保水性を高
め、酵素および指示薬と被検査中の検査目的成分
である病理学的成分との間の反応を円滑に進める
作用を奏するものであり、例えば、シリカ系クレ
ー、炭酸カルシウム、ケイ酸アルミニウム、ガラ
ス、セルロース等の無機質系あるいは有機質系微
粉末が利用される。 本発明の体液成分検査用試験片において、前記
検査区域層を形成する際に利用されるインキ組成
物は、酵素と指示薬と結合剤と吸水性の微粒子と
を必須の成分として含有する有機溶媒の混練物か
らなるものであり、前述の必須の成分に加えて、
例えば、緩衝剤や検査区域層の水濡れ性、発色の
均一性等を向上させるためのアニオン系、カチオ
ン系、非イオン系の界面活性剤等が必要に応じて
添加される。 インキ組成物に利用される有機溶媒は、例え
ば、アルコール類、ケトン類、芳香族系、エステ
ル類、炭化水素類等の有機溶剤であつて、結合剤
を溶解し得る溶剤が選択、利用される。 なお、利用される有機溶媒中に水分が含まれて
いると、インキ組成物中の酵素の活性が急速に失
われるので、予め脱水処理されている有機溶剤を
利用するのが好ましく、また、有機溶媒の中で
も、メタノールは、緩やかではあるが酵素の活性
を失わせる傾向を有するので、出来れば避ける方
が好ましい。 検査区域層を形成する際に利用されるインキ組
成物は、凍結乾燥されている酵素、指示薬および
必要に応じて添加される緩衝剤等を粉砕し、約
25μ以下の粒子に粉砕した後に、この酵素、指示
薬、吸水性の微粒子、緩衝剤等を、結合剤が溶解
させてある有機溶媒中に分散、混練することによ
つて容易に得られる。 なお、この分散、混練操作は、高速撹拌機、サ
ンドミル、ボールミル、ホモゲナイザー、３本ロ
ール、超音波分散機等で行なわれる。 前述の構成からなるインキ組成物による検査区
域層が設けられる試験片用基体には、前述の体液
中に含有される病理学的成分並びに酵素および指
示薬等に影響を及ぼすようなことがなく、また、
体液検査を妨げることのないものであればいかな
るものであつても良く、例えば、紙、合成紙、各
種のプラスチツクフイルム、これらの２種以上の
複合体等が利用される。 インキ組成物による検査区域層を試験片用基体
に対して形成するには、公知の印刷または塗布、
乾燥方法が利用し得る。 特に、塗布量が比較的多く、かつ、一定の塗布
量で印刷し得る印刷方法、すなわち、シルクスク
リーン印刷、凹版印刷、グラビア印刷等が好適で
ある。 なお、検査区域層におけるインキ組成物の塗布
量は、通常２〜30ｇ（固形成分）／m²が好適であ
る。

【作用】

本発明の体液成分検査用試験片は、試験片用基
体と該基体の表面に形成されている検査区域層と
を有しており、前記検査区域層が、酵素と指示薬
と結合剤と吸水性の微粒子とを有機溶媒中に分
散、混練させたインキ組成物の印刷または塗布、
乾燥によつて形成されているものである。 前記構成による本発明の体液成分検査用試験片
は、該試験片における検査区域層を形成する際の
インキ組成物中に分散されている酵素が、変質し
難く、安定しているため、インキ組成物の保存が
可能であり、体液成分検査用試験片の製造時にお
けるインキ組成物の取り扱いが容易である等によ
つて、品質の良好な試験片が容易に得られる。 本発明の体液成分検査用試験片の検査区域層の
形成に利用されるインキ組成物中で酵素が変質し
難く、長期間に互つて安定している理由は明らか
ではないが、前記インキ組成物中においては水溶
性の酵素が有機溶媒に溶解することなく分散状態
で存在するため、酵素を構成する蛋白質の高次構
造および活性部位での変性を受け難く、仮に、有
機溶媒との界面付近の部位に変性を受けたとして
も、酵素の内部にまではこの有機溶媒が浸透し難
く、このことによつて、酵素の活性が保護される
ものと推定される。 なお、前述の推定は、有機溶媒と水との混合溶
媒中では、酵素の活性が急速に低下する事実によ
つても裏付けられる。

【実施例】

以下、本発明の体液成分検査用試験片の具体的
な構成を、製造実施例に基づいて説明し、併せ、
該試験片の作用を説明する。 実施例 １ 下記組成の組成物を、ホモミキサーで微細分散
させることによつて、グルコース検出用のインキ
組成物［ａ］を調整した。 グルコースオキシダーゼ｛東洋紡績(株)、Grade
｝ ……0.5重量部 ペルオキシダーゼ｛東洋紡績(株)、Grade ｝
……0.1重量部 ０−トリジン ……0.5重量部 ポリオキシチレンソルビタンモノオレエート
……1.0重量部 イソブチレン／無水マレイン酸共重合体｛クラレ
イソブチレンケミカル、イソバン＃60
……3.0重量部 ｎ−ブタノール ……50.0重量部 カオリン ……45.0重量部 厚さ300μの白色ポリスチレンフイルムによる
試験片用基体上に、前記得られたインキ組成物
［ａ］による一辺が６mmの正方形のパターンを印
刷した後、80℃で１時間の乾燥に付すことによつ
て検査区域層を形成した。 次いで、前記白色ポリスチレンフイルムを、略
６mm×100mmの短冊状に、かつ、得られる短冊状
片の一方の端部に前記正方形のパターン印刷部か
らなる検査区域層が位置するようにして裁断し、
本発明の１実施例品である体液成分検査用試験片
を得た。 なお、前記印刷の際に利用したスクリーン版の
メツシユは100で、レジストとスクリーン紗との
厚さの合計は略100μである。 ［実験１］ 得られた体液成分検査用試験片を、既知のグル
コース濃度を含有する尿中に手早く浸漬し、30秒
後の色調を観察した。 結果を第１表に示す。 なお、第１表における色調の表示は、JIS
Z8721による標準色標によるものである。

【表】 第１表中に表示されている結果から、前記実施
例品の体液成分検査用試験片により、グルコース
濃度0.05％を含有する尿の測定が可能であること
が明らかである。 比較例 １ 下記組成物による溶液［ｂ］を調整した。 グルコースオキシダーゼ｛東洋紡績(株)、Grade
｝ ……0.6重量部 ペルオキシダーゼ｛東洋紡績(株)、Grade ｝
……0.15重量部 ０−トリジン二塩酸塩 ……0.5重量部 クエン酸−クエン酸ナトリウム緩衝液（PH＝5.5）
……80重量部 ゼラチン水溶液（５重量％） ……82.5重量部 蒸留水 ……20重量部 エチルアルコール ……23.7重量部 得られた含浸用溶液［ｂ］を、瀘紙（東洋ろ
紙、No.51）に約10分間含浸させた後、50℃で２時
間の乾燥に付し、体液成分検査用組成物の含浸紙
を得た。 次いで、前記含浸紙を一辺が６ｍの正方形に裁
断した後、略６mm×100mmの短冊状片をなす白色
ポリスチレンフイルムの一方の端部に、両面接着
転写テープ（スリーエム）を利用して貼着し、比
較のための体液成分検査用試験片を得た。 比較例 ２ 下記組成のインキ組成物［ｃ］を調整した。 グルコースオキシダーゼ｛東洋紡績(株)、Grade
｝ ……0.4重量部 ペルオキシダーゼ｛東洋紡績(株)、Grade ｝
……0.1重量部 ０−トリジン ……0.5重量部 スチレン／マレイン酸共重合体樹脂溶液｛星光化
学工業(株)、Ｘ−1202LL｝ ……30.0重量部 PH緩衝液（PH＝7.0） ……20.0重量部 エチルアルコール ……15.8重量部 カオリン ……15.0重量部 厚さ300μの白色ポリスチレンフイルムによる
試験片基体上に、前記得られたインキ組成物
［ｃ］による一辺が６mmの正方形のパターンを印
刷した後、45℃で２時間の乾燥に付した。 なお、前記印刷の際に利用したスクリーン版の
メツシユは100で、レジストとスクリーン紗との
厚さの合計は略100μである。 次いで、前記白色ポリスチレンフイルムを、略
６mm×100mmの短冊状に、かつ、得られる短冊状
片の一方の端部に前記正方形のパターン印刷部か
らなる検査区域層が位置するようにして裁断し、
比較のための体液成分検査用試験片を得た。 ［実験２］ 前述の実施例１および比較例１〜２で得られた
体液成分検査用試験片を、既知のグルコース濃度
を含有する尿中に手早く浸漬し、それぞれ予め設
定されている判定時間経過時における色調を観察
した。 結果を第２表に示す。 なお、色調の判定に際しては、各試験片による
グルコースによる色調の変化が最も顕著となる経
過時間を 予め試験しておき、その時間を判定に
要する経過時間として選択した。

【表】 前記第２表より、実施例１による体液成分検査
用試験片による検査が、優れた定量性を有してい
ること、および、発色後の色調の安定性が良好で
あることが明らかである。 実施例 ２ 前記実施例１に記載したインキ組成物［ａ］を
調整した後に、40℃で１〜７日間放置し、さら
に、前記実施例１の対応する手順と同様の手順に
よつて、本発明の別の実施例品たる体液成分検査
用試験片を得た。 比較例 ３ 前述の比較例１に記載した含浸用溶液［ｂ］を
調整した後に、40℃で１〜７日間放置し、さら
に、前記比較例１の対応する手順と同様の手順に
よつて、比較のための体液成分検査用試験片を得
た。 比較例 ４ 前記比較例２に記載したインキ組成物［ｃ］を
調整した後に、40℃で１〜７日間放置し、さら
に、前記比較例２の対応する手順と同様の手順に
よつて、比較のための体液成分検査用試験片を得
た。 ［実験３］ 前述の実施例２および比較例３〜４で得られた
各体液成分検査用試験片を、0.5％グルコース溶
液中に手早く浸漬し、それぞれ前述の［実験２］
における対応する判定時間経過時の着色濃度を反
射型濃度計で測定し、先の［実験２］で得られた
着色濃度と比較した。 ［実験２］で得られた着色濃度を100としたと
きの各体液成分検査用試験片の相対濃度（％）を
第３表に示す。

【表】 ＊……インキのゲル化によつて試験
片の作成が不可能
第３表に示される結果より、実施例２による体
液成分検査用試験片は、インキ組成物の調整直後
でなくても、品質の変わらない検査用試験片とな
るが、比較例３〜４では、含浸用溶液やインキ組
成物の調整後に試験片用基体に適用して得られた
試験片と比較して、その保存時間が長くなるに従
つて、得られる検査用試験片の品質が低下するこ
とが明らかである。

【発明の効果】

本発明の体液成分検査用試験片は、前記実施例
および比較例によつて明らかなように、試験片の
表面に形成されている検査区域層おける呈色が、
その被検査液中の含有量に対応して明瞭に変化す
るため、精密な検査結果を手軽に得られる。 また、本発明の体液成分検査用試験片は、検査
区域層を形成する際に調整されるインキ組成物の
保存安定性が良好であり、しかも、検査区域層が
通常の印刷手段または塗工手段によつて形成され
るものであるため、その製造がきわめて簡単であ
り、品質の良好な製造が工業的規模で大量生産し
得る。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 試験片用基体と該基体の表面に形成されてい
   る検査区域層とを有する体液成分検査用試験片に
   おいて、前記検査区域層が、酵素と指示薬と結合
   剤と吸水性の微粒子とを有機溶媒中に分散、混練
   させたインキ組成物の印刷または塗布、乾燥によ
   つて形成されていることを特徴とする体液成分検
   査用試験片。