JPH0517209B2 - - Google Patents

Description

請求の範囲 １ オキアミ目に属する動物から単離されたエキ
ソ−及びエンド−ペプチダーゼ混合物含有酵素製
剤を含む、治療用クリーニング剤として使用する
ための組成物。 ２ 酵素がホモジナイズした動物から水性抽出に
より単離されることを特徴とする請求の範囲１に
記載の組成物。 ３ 酵素が約15000〜80000ダルトンの分子量を有
するか又はかかる酵素の活性凝集体であることを
特徴とする請求の範囲１又は２に記載の組成物。 ４ 酵素がさらに蛋白質分解酵素を含有すること
を特徴とする請求の範囲１〜３のいずれか一項に
記載の組成物。 ５ 生存組織から失活成分、例えば壊死組織、
膿、フイブリン及び凝固血液を除去することがで
きることを特徴とする請求の範囲１に記載の組成
物。 ６ 創傷、熱傷又は皮膚病の治療に、特に壊死性
創傷の酵素的創傷清拭に使用することを特徴とす
る請求の範囲１に記載の組成物。 ７ 担体及び／又は添加物をさらに含むことを特
徴とする請求の範囲１に記載の組成物。 ８ １種若しくはそれ以上の界面活性剤をさらに
含むことを特徴とする請求の範囲１に記載の組成
物。 ９ 軟膏、クリーム、スプレー、粉末、パスタ
剤、ゲル、リニメント剤、バンデージ、オイル、
錠剤、カプセル、シロツプ又は液剤として処方さ
れることを特徴とする請求の範囲１に記載の組成
物。 発明の分野 本発明は、オキアミ目（EuphauSiaceae）又
は魚類に属する動物よりなる群から選択された水
生動物からの消化酵素及び／又は組織酵素製剤を
含有する組成物に関する。この組成物は、生物又
は死物（living or dead material）から生物学
的起源の汚染物質又はかかる汚染物質の分解生成
物を分解及び除去することによつて、生物又は死
物をクリーニングするために用いられる。本発明
により、前記の物質から前記の汚染物質を除去す
るための方法、及び本発明により使用されるべき
組成物の製法も同様に提供される。 本明細書中及び請求の範囲中に使用される酵素
という用語は、他の規定のない限り、活性酵素を
意味する。 本発明は概して、哺乳動物の治療用クリーニン
グに関する。本発明におけるクリーニングという
概念は、例えば、膿（化膿性滲出物）、繊維素
（フイブリン）、凝固した血液、血性痂皮及び壊死
組織のような物質を除去することによる人間及び
動物のクリーニングを包含する。このクリーニン
グは、創傷、火傷及び皮膚病の治療のために、例
えばいわゆる酵素的創傷清拭（enzymatic
debridement）のために特に重要であるが、汚染
物質が発生し得るその他の生体領域において実施
することもできる。尿道及び膀胱が、かかるその
他の領域の例である。 動物における酵素の通常の消化作用、並びに死
後の動物におけるその自己分解作用は、クリーニ
ングという用語には包含されない。 技術的背景 オキアミ目に属する甲殻類（krill）の中には、
種々の酵素、例えばプロテイナーゼ（至適 PH−
酸性及び中性〜アルカリ性）、ペプチダーゼ、（エ
クソー及びエンドペプチダーゼ）、リパーゼ、ホ
スホリパーゼ、アミラーゼ及びその他の炭水化物
分解酵素、ホスフアターゼ、ヌクレアーゼ、ヌク
レオチダーゼ及びエステラーゼの混合物が存在す
る（T.E.Ellingsen；Bio−kjemiske Studier
over Antarktisk Krill；Dr.ing av−handling；
Institutt for Teknisk Biokjemi，Norges
Tekniske Hogskole，Trondheim（1982年））。
オキアミ目甲殻類からの水抽出物中に存在する蛋
白質分解（トリプシン様）活性についての研究報
告はある（C.−S.Chen etal；J.Food Biochem.、
第２巻（1978年）、第349−66頁）。カラフトシシ
ヤモ（capelin）からの水抽出物に種々のプロテ
アーゼ活性があることもすでに報告されている
（Ａ Gildberg；Autolysis of fishtissus−
General aspects；Thesis；Institute of
Fisheries，University of Tromsφ Norway，
1982年）。 1913年頃に、洗浄剤中に酵素を使用することが
提案されていた。死物のクリーニング用酵素組成
物、例えば洗濯用洗剤は桿菌（Bacillus）属から
の種々の微生物プロテアーゼをベースとしてい
た。一般に使用されるかかるプロテアーゼの１種
は、枯草菌（Bacillus subtilis）株から得られ、
とりわけアルカラーゼの商品名（Novo
Industri、コペンハーゲン、デンマーク）で市販
されたサブチリシンである。種々のリパーゼもク
リーニング用、特に脂質分解用に使用されてき
た。かかる組成物は、酵素のほかに漂白剤、例え
ば過硼酸塩及び種々の陰イオン、陽イオン、及び
中性洗浄剤も含有していた。今までに使用された
酵素は、一般の酵素同様、比較的に不安定であつ
た。 前記の成分の、創傷清拭のために市販された最
も重要な酵素組成物は、ストレプトキナーゼ−ス
トレプトドルナーゼ（バリデース（登録商標）、
Lederle Lab.，American Cyanamid
Company，Wayne，New Jersey，USA）、安定
化された結晶化トリプシン（トリピユア（登録商
標）、Novo Industri，コペンハーゲン、デンマ
ーク）及びデオキシリボヌクレアーゼと結合した
牛フイブリノリシン（エラーゼ（登録商標）、
Parke Devis ＆ Company，デトロイト、ミ
シガン、USA）である。ストレプトキナーゼは
主にDNAへの作用を介して壊死物質に作用し、
ストレプトドルナーゼは特異的な繊維素溶解作用
を有する。トリプシンは蛋白質分解作用を有する
牛の膵臓抽出物である。フイブリノリシン−デオ
キシリボヌクレアーゼは、２種の酵素の組合せ
で、１種は繊維素を分解する酵素、もう１種は膿
の中の重要な１成分であるデオキシリボ核酸に作
用するものである。 マロータス属 ビロズス（Mallotus villosus）
（カペリン）からの特異的なペプシン様酵素（ペ
プシン）の１種が火傷の医学的治療に使用され
ることが、提案された（Gildberg Ａ；前記参
照、第89−90頁）。ある基質に作用する１種の特
異的な酵素を使用しても、創傷中に存在する汚染
物質の分解には限度がある。しかしながら、この
ペプシン様酵素とその他の酵素とを組合せて、人
間の治療を目的とするクリーニングに使用するこ
とは提案されていなかつたのである。 前記の酵素製剤には多くの欠点があつた。例え
ば、それらはいずれも比較的に不安定であり、保
管中か使用中に、その活性が急速に減衰する。そ
の活性は屡々一定のPH範囲、例えば中性〜中等度
にアルカリ性のPH範囲に限定される。それらの活
性は多くの場合一定の温度範囲に限られる。＋50
℃以上の温度では活性は急速に損失し、室温又は
通常の戸外温度ではその活性は低い。 バリデース（登録商標）、トリピユア（登録商
標）及びエラーゼ（登録商標）の効果は、その目
的のためには比較的不十分である。中程度の創傷
清拭作用が通常３週間にわたる治療期間後に達成
されるだけである。 発明の目的 本発明の１つの目的により、前記の欠点に関し
て改善されたクリーニング用組成物が提供され
る。第二の目的により、生物学的起源の物質又は
かかる物質からの分解生成部、特に蛋白質及び脂
質の両方を含有する汚染物質を除去すべく使用さ
れるべき改善された組成物の製法が提供される。
第三の目的により、前記の汚染物質から生物をク
リーニングするための新規な改良方法、特に繊維
素、凝固血液及び失活組織の成分を分解し、かつ
それによりそれらの含水量を殆んど増加させずに
除去し易くさせることによつて、繊維素、凝固血
液及び失活組織の創傷清拭のための新規な改良方
法が提供される。従つて、本発明は従来の組成物
よりもより有効な酵素を有する組成物をベースと
している。これは、当該汚染物質への全ての酵素
作用に有効である。 発 明 これらの目的は、生物学的起源の汚染物質を溶
解し得かつ上記に挙げた動物から取り出される酵
素製剤を有効量含有する組成物を使用することに
よつて達成される。それらの動物からの酵素混合
物は高収率で簡単に得ることができる。目下のと
ころ、酵素製剤のための最も好ましく有用な供給
源は、オキアミ目、例えば南極オキアミ目甲殻類
（Euphausia superba）、Euphausia
crystallorophias、及び関連種、並びに
Meganyctiphanes norvegica，Tysanoessa
inermis及びその他の関連種を含めたその他の種
のオキアミ目甲殻類である。魚類の中では、
Mallotus属特にMallotus villosus（カラフトシシ
ヤモ）類の魚類が本発明では好ましい。その他と
しては、サバが挙げられる。 本発明のための最も重要な酵素活性は、動物の
消化管から派生するようである。動物から得られ
る種々の酵素活性が複雑に混合されているため
に、その組成物がそれらの起源に係わりなく、生
物学的な汚染物質を極めて急速に分解させ得るの
であろう。酵素は、アルカリ性、中性、かつ酸性
媒体中で活性を示し、種々の界面活性剤（張力剤
及び乳化剤）、及び／又はその他の成分、例えば
担体及び添加物と一緒に、クリーニング組成物中
に使用され得る。 組成物が酵素の混合物を含有し得るからこそ、
脂質、燐脂質、バイオポリマー（例えば蛋白質、
ペプチド、核酸、ムコ多糖類、及び多糖類）、並
びにかかる化合物の分解生成物よりなる群から選
択された物質の混合物を含有する汚染物質の除去
にこの組成物が有用なのである。これらの化合物
は、膿、血液痂自皮及び壊死組織中に存在する。 本発明によれば、使用する酵素が15000〜80000
ダルトンの範囲の分子量を有するか、又はかかる
酵素の活性凝集体を有する場合に、特に良好な結
果が得られる。殊に、分子量約20000〜約40000ダ
ルトンを有する酵素が有利である。これらの範囲
は、動物をホモジナイズし水抽出して得られる酵
素、すなわち殊に抽出中に水にとける酵素にあて
はまる。得られる酵素製剤は蛋白質分解酵素、エ
キソ−及びエンド−ペプチダーゼ混合物等を含有
する。 本発明の１つの実施態様は、新規な酵素クリー
ニング組成物及びその製法に関する。その方法
は、オキアミ目の動物、又は魚類から産出された
酵素製剤を、１種又はそれ以上の水不溶性又は水
溶性の水性又は非水性担体に、必要な場合には適
当な添加物と一緒に、混合、溶解、結合又はさも
なくば組合せることを特徴とする。新規組成物は
軟膏、粉末、パスタ剤、クリーム、スプレー、ゲ
ル、リニメント剤、バンデージ、油状物、錠剤、
シロツプ、顆粒、カプセル、錠剤等の形態であれ
ばよい。 緩衝物質、単一溶剤としての水、及び当該動物
からの酵素製剤のみより成るある非殺菌性均質水
溶液は、新規組成部の概念からは除外される。か
かる水溶液は前記の刊行物中に記載されている。
同様のことが添加物を含有しない凍結乾燥した水
抽出物にもあてはまる。 現在最も有利な実施態様では、使用する製剤中
の酵素は水溶性で及び／又は前記範囲内の分子量
を有する。 本発明はまた、生物からの生物学的汚染物質
を、例えば酵素的創傷清拭により除去するための
方法に関する。本方法は、前記の物質上に存在す
るかかる汚染物質を、前記の動物から取り出した
有効量の酵素、例えば蛋白質分解及び／又は脂肪
分解に有効な量の酵素を含有する酵素組成物と接
触させ、その後に、組成物を分解又は溶解した汚
染物質と共に前記物質から除去することを特徴と
する。現在最も有利な実施態様においては、本方
法は分子量約15000〜約80000ダルトンを有する酵
素（その活性凝集体を包含する）又はかかる酵素
の活性凝集体を使用する。特に、分子量約20000
〜約40000ダルトンの酵素が好ましい。例えば膿、
血液痂皮及び壊死組織の如き失活物質、及び繊維
素又は凝固血液の除去には極めて有利である。こ
れは、それらの物質を生存組織から除去する場合
に特に有効である。 汚染物質を分解及び／又は溶解させるのに必要
な期間は、場合により変化するが、酵素が汚染物
質を分解及び／又は溶解させるのに十分な時間を
選択すべきである。必要ならばこの処置を繰り返
してもよい。 使用する酵素製剤は、例えば前記したタイプの
種々の酵素を広範囲に含有させてもよい。本発明
によれば、組成物中の１種又はそれ以上の酵素が
それ自体公知の方法、例えばある酵素に対して特
異的な阻害剤を添加することにより、又は当該酵
素を除去することにより除去された組成物を使用
することが可能である。 至適温度での蛋白質分解活性は、PH５−10の範
囲で高い。至適PHは７−９である。良好な蛋白質
分解活性のための温度範囲は25−70℃であり、至
適温度範囲は30−55℃である。活性は０℃に下つ
ても維持されている。 前記の温度及びPH範囲は本発明の種々の適用に
全て用いられ得るが、その他の範囲を用いても実
施可能である。 動物からの酵素の調製は公知の方法により行な
われる。例えば、新鮮な又は新鮮な凍結動物をホ
モジナイズし（homogenize）、水性媒体（例えば
水）で抽出してもよい。得られた抽出物を凍結乾
燥し、貯蔵してもよい。抽出物を更に、例えば脂
質を抽出する為に脂質溶解溶剤で抽出して精製す
ることができる。それ以上の精製を必要とする場
合には、ゲル濾過、限外濾過又は膜濾過を実施す
ることができる。利用可能なその他の精製工程
は、イオン交換及びアフイニテイーカラムクロマ
トグライーである。抽出及びホモジナイゼーシヨ
ンは＋５℃以下又は＋５℃近くの冷所で実施すべ
きである。 水抽出して得られた酵素製剤を直接又は、必要
ならば、更に精製した後に使用すればよい。殆ん
どの場合、脂質が抽出された後の製剤を凍結乾燥
することが有利である。そのような場合には、得
られる粉末を長時間貯蔵することができる。各適
用分野で、特異的組成物又はその形態が要求され
る。かかる形態はそれ自体公知である。従つて本
発明は、種々の形態、例えば凍結乾燥酵素、均質
水溶液の形態の酵素組成物または又は前記しかつ
新規であると請求した酵素組成物に関する。各組
成物中の酵素の正確な量は場合に応じて−純粋な
凍結乾燥した抽出物の場合から極めて複雑な洗浄
組成物の場合まで一変化する。酵素の量は、汚染
物質が除去されるべき物質に悪影響を与えること
なく、意図する汚染物質を分解及び／又は溶解さ
せるのに十分な量でなくてはならない。新規なク
リーニング組成物中のその他の成分は、組成物を
使用するに必要な条件下で悪影響を与えることの
ないように、選択されなければならない。 最終組成物中に存在する酵素製剤の量は0.0001
％（ｗ／ｗ）乃至100％である。プロテアーゼ活
性に関しては、最終組成物は１mg当り0.0001乃至
0.1の酵素単位を含有してよい。使用する酵素製
剤の純度に依り、前記範囲外が適用されてもよ
い。前記の酵素単位は、基質としてカゼインを用
い１分間当りのチロシン当量μモルとして示され
る。 本発明の組成物中には種々の添加物及び担体が
配合され得る。適当な担体（carrier）は、無菌
の、水性及び生理学的に許容され得る塩溶液、有
機及び無機ゲル形成物質（例えば重合体）、シリ
コーン油及び組成物に所望の物理的特性を与える
その他の物質及びそれらの混合物がよい。添加物
としては、殺菌剤、香料、種々の陰イオン、陽イ
オン、両性イオン、及び中性界面活性剤（張力剤
（tensides）及び乳化剤）が挙げられる。かかる
成分はそれ自体酵素的創傷清拭用酵素組成物に関
連してすでに公知である（例えば参照文献として
のドイツ国特許出願第2130833号明細書、英国特
許第1280497号明細書、同第1296901号明細書及び
同第1573964号明細書、及び米国特許第3627688号
明細書、同第3855142号明細書、同第4212761号明
細書、同第4243546号明細書、同第4242219号明細
書、同第4287082号明細書、同第4305837号明細書
及び同第4307081号明細書参照）。創傷した生存組
織の治療のために、生理学的かつ製薬学的に許容
され得る担体を含有するか、又は全く担体を含有
しない組成物を使用することが有利である。かか
る組成物は無菌であつてもよい。滅菌は、例えば
組成物が溶液である場合には滅菌濾過により実施
することができる。無菌組成物は無菌条件下で無
菌成分を混合することによつても得ることができ
る。 本発明の種々の実施態様は、明細書に添附の請
求の範囲から更に明らかになるであろう。以下
に、本発明を非限定的種々の実施例につき説明す
る。 実施例 １ Ａ オミアミ目甲殻類（krill）抽出物の調製 南極の夏期に捕え、直ちに冷凍し、約−80℃
で約２年間貯蔵したオキアミ目甲殻類
（Euphausia superba）を、約＋５℃の室内に
置く。オキアミ目甲殻類がほとんど解凍した時
に、オキアミ目甲殻類25ｇを温度０℃の脱イオ
ン水50mlと混合する。混合物をホモジナイズ
し、次いで冷所（約０℃）で１時間半12500ｇ
で遠心分離にかける。赤色上清を傾瀉後、保存
する。沈澱物を脱イオン水50ml中に再懸濁し、
前記と同様に遠心分離にかける。新たな上清を
傾瀉し、最初の抽出からの上清と合わせる。 抽出物から脂質を除去するために、CCl₄20
mlを、合した上清に加え、冷所（０℃）でホモ
ジナイズする。混合物を冷所で2500ｇで15分間
遠心分離する。水相を除去し、もう一度CCl₄
で抽出し、前記と同様に遠心分離にかける。水
相を1Bで使用するが、ここで水相は水抽出物
として示されている。 Ｂ ゲルクロマトグラフイーによる追加精製 Ａからの水抽出物20mlを、直径3.1cm及び高
さ69cmのカラムに充填したセフアデツクス Ｇ
−100（エピクロロヒドリンで架橋されたデキス
トラン、Pharmacia Fine Chemicals AB，
Uppsala， Sweden）を用いてクロマトグラ
フ処理する。カラムを平衡化し、トリス−HCl
緩衝液（0.05M、PH7.5）を用いて＋５℃で溶
離させる（１時間あたり30ml）。画分を集める。
溶離曲線を、280nmのUV吸収を測定すること
により分光学的にモニターし、各画分の蛋白質
分解活性を測定する。酵素活性な画分を集め、
脱イオン水で透析する。最後に集めた画分を凍
結乾燥したものを、本発明により使用する。 画分中及び凍結乾燥調製物中の蛋白質分解活
性を、基質としてヘモグロビン及び／又はカゼ
インを用い、測定する（Rick W.I.；Methods
of Enzymatic analysis；Ed Bergmeyer，
HU；第２巻、第1013−23頁（1974年）；
Academic Press New York）。ゲルクロマト
グラフイーを実施すると、酵素活性は分子量
20000−40000ダルトンに相当する画分から主に
回収される。 実施例 ２ カラフトシシヤモ抽出物の調製 ９月にフインマルク（ノルウエー）沖で捕えた
カラフトシシヤモ（Mallotus villosus）を冷凍
し、−20℃で１年間貯蔵した。その後、冷凍カラ
フトシシヤモを５℃に置いた。24時間後に、消化
管を含む腸を、部分解凍したカラフトシシヤモか
ら取り出した。腸25ｇを脱イオン水50mlと混合
し、０℃でホモジナイズした。続いて、混合物を
12500ｇで１時間半遠心分離にかけた。いくらか
濁つている上清を傾瀉し、集める。沈澱物を脱イ
オン水50ml中に再び懸濁し、前記と同様に遠心分
離する。新しい上清を傾瀉し、最初の抽出からの
上清と合わせる。 抽出物から脂質を除去する為に、CCl₄20mlを、
合した上清に加え、冷所（０℃）でホモジナイズ
した。混合物を冷所で2500ｇで15分間遠心分離に
かけた。水相を取り除き、もう一度四塩化炭素で
抽出し、前記と同様に遠心分離にかけた。最後に
水相を凍結乾燥した。 実施例 ３ Mallotus villosusからの酵素を含有する組成
物 Ａ （実施例２からの）カラフトシシヤモからの
凍結乾燥酵素製剤10mgを、酢酸カルシウム0.4
mg及びamylum resorb（Biosorb（登録商標）；
Arbrook，Kirkton Campus，Livingston，
Scotl and）と混合する（全量１ｇ）。 そうして得た均質粉末を生理食塩溶液
（saline）10ｇ中で撹拌し、湿性包帯に使用す
ることができる。 Ｂ （実施例２からの）凍結乾燥カラフトシシヤ
モ製剤10mgを、ポリエチレングリコールゲル
（Macrogol 600及びMacrogol 800（Hoechst，
Federal Republic of Germany）を等量含有
する）と混合する（全量１ｇ）。半固体で、均
質の濃度を有する１％酵素組成物が得られる。 実施例 ４ 溶液中にオキアミ目甲殻類酵素を含有する組
成物 （実施例1Bからの）凍結乾燥酵素製剤10mgを
酢酸カルシウム0.4mg及びamylum resorbと混合
する（全量１ｇ）。そうして得た均質粉末を生理
食塩溶液10ｇと振り混ぜ、得られる組成物を、寸
法３×３cmで４層のガーゼからなる滅菌湿布を浸
すために使用する。湿らした湿布は壊死創傷の治
療に用いられる。湿布をはり付けるために、ガー
ゼを湿布のまわりに２回巻く。この包帯にそれか
ら更に絆創膏をはり付ける。湿布を４時間毎に組
成物で浸す。創傷を被う湿布のその部分に限定し
て適用するために、目の大きい尖を有する注入用
力ニユーレを用いて混合物を施こす。１日に１
回、包帯全体をとり除き、新しい包帯に替える。
この処理で、分解し崩壊した壊死部分は機械的に
除去されるはずである。実施した特異的処理で、
創傷は１週間後にきれいになつた。 実施例 ５ 壊死物質に対するオキアミ目甲殻類酵素の作用 ヒトの皮膚上にある壊死成分に対するオキアミ
目甲殻類酵素の作用を試験するために、次の実験
を行つた： ２人のヒトの右手の上側の無傷皮膚上に、壊死
物質を塗布した。壊死物質は足の創傷からのもの
であつた。壊死物質は失活コラーゲン組織、凝固
血液、繊維素、膿及び痂皮よりなつていた。各人
に塗布した量は0.5ｇであつた。 各人上の壊死物質を、実施例４と同様に製造し
たオキアミ目甲殻類酵素組成物で浸した湿布（面
積10cm²）で被つた。各湿布をガーゼで被つた。４
時間後に、両方の湿布ともほとんど完全に乾燥
し、そのためにより多量の酵素組成物を加えなけ
ればならなかつた。12時間後に湿布をとり除き、
各手の上に残つている壊死物質を別々に秤量し
た。壊死物質は特有の分解微候を示し、その重量
は約25％減少した。試験中、壊死物質と接触して
いた皮膚は影響をうけなかつた。被検者に負の症
状は認められなかつた。 実施例 ６ 小壊死創傷のある人間への生体内試験 右の人指し指に壊死物質を含む小潰瘍を有する
人間に、５日間にわたり毎日、（実施例４のよう
に製造した）１％オキアミ目甲殻類酵素溶液を適
用した。創傷面は酵素組成物に十分に許容性を湿
し、清浄化及び上皮形成化への著しい傾向を示し
た。副作用は認められなかつた。 実施例 ７ 両性界面活性剤と組合せたオキアミ目甲殻類酵
素による多脂質性脂漏皮膚に対するクリーニン
グ効果 アルキルイミダゾリン18.00％（ｗ／ｗ）、ラウ
リルーポリペプチド縮合物1.90％（ｗ／ｗ）、ウ
ンデシレニルーポリペプチド縮合物1.70％（ｗ／
ｗ）、脂肪物質（ラノリン）で緩衝した変性アル
キルエーテルサルフエート28.00％（ｗ／ｗ）、コ
コナツツ−アミンサルコシネート1.40％（ｗ／
ｗ）、ウンデシレン酸1.90％（ｗ／ｗ）、ウンデシ
レン−モノタノールアミドスルホスクシネート
2.00％（ｗ／ｗ）、PH6.4、乳酸十分量及び２度蒸
溜した（aqua bi dest）水よりなる常用の洗浄剤
（全量100.00％（ｗ／ｗ））を使用した。 （実施例1Bからの）凍結乾燥したオキアミ目
甲殻類酵素製剤を適量洗浄剤に加え、１％（ｗ／
ｗ）酵素洗浄剤組成物を生ぜしめた。胸骨部に明
らかな油性脂漏を有する２名の人間の胸骨部の皮
膚面10cm²を試験のために選んだ。それらの面を１
日２回、５日間にわたり酵素洗浄剤組成物で洗つ
た。同じ面からのサンプルを洗浄期間の前後に採
取した。サンプルを集め、Schaeffer Ｈ及び
Kuhn−Bussius H.（Arch. Klin.u.exper.Der−
malol.，第238巻、（1970年）第429頁）に準じて、
光度計で分析した。 結果は２被検者の両方で、透過値の著しい低下
を示した。従つて、このことは、使用した酵素組
成物による皮膚の脂質の分解を示す。これに対し
て、２名の人間が酵素を含まない洗浄剤のみを使
用した場合には、極めて僅かしか効果が得られな
かつた。 実施例 ８ 繊維素、壊死物質及び凝固血液の分解 Ａ 繊維素（Fibrin） 繊維素を、重量0.2−0.3ｇの断片数枚に切り
はなした。使用する各酵素組成物のために、試
験管20本に番号をつけ、その各々に前もつて重
量をはかつておいた繊維素片を加えた。各組成
物の試験管20本に、等量の酵素組成物を加え
た。バリデース（登録商標）を蒸溜水中で１：
20（ｗ／ｖ、市販製剤に基づく）の希釈度で使
用した。トリピユア（登録商標）（Trypure）
を生理食塩水中で１：15（ｗ／ｖ、市販製剤に
基づく）の濃度で使用した。その他の酵素製剤
は生理食塩水で希釈し、そうして得た組成物の
濃度は表２に示されている。使用するオキアミ
目甲殻類酵素及びカラフトシシヤモ酵素は、
夫々実施例1B及び２に従つて得られた凍結乾
燥製剤であつた。研究は、創傷温度と同じであ
る温度＋33℃で行なつた。12時間及び24時間後
に各々反応を中止し、残留する繊維素を集め、
湿つた瀘紙上に60秒間保持し、秤量した。パパ
イン、フイシン及びパンクレアチンは全てE.
Merck，Darmstadt，Germanyから入手した。 表 １ 繊維素に対する各種酵素組成物の作用。 濃度は％ ｗ／ｖで示した。 − は重量において０−25％減少 −− は重量において26−50％減少 −−− は重量において51−75％減少 −−−− は重量において76−100％減少

【表】 繊維素は、オキアミ目甲殻類酵素、カラフト
シシヤモ酵素及びトリピユア（登録商標）を含
有する組成物により上記順番で最も短い時間
で、溶解した。バリデース（登録商標）及びア
ルカラーゼ（登録商標）はフイシンと同程度
で、パパインは最も弱い効果を有した。 Ｂ 壊死物質の分解 壊死物質（necroses）を0.2−0.3ｇの断片に
切つた。使用する各酵素組成物のために、試験
管20本に番号をつけ、これらの管の各々に前も
つて重量を測つておいた壊死物質片を加えた。
各組成物の試験管20本に、当量の各酵素組成物
を加えた。使用する組成物を表２に示し、それ
らの濃度を生理食塩水中％（ｗ／ｖ）として示
す。バリデース（登録商標）及びトリピユアを
実施例8Aに従つて希釈した。12、24、36及び
72時間経過後に、分解を中止し、壊死物質を集
め、重量を測つた。 表 ２ 各種酵素組成物の壊死物質に対する作用。 濃度（％）はｗ／ｖを基に計算する。 −−−− は重量において76−100％減少 −−− は重量において51−75％減少 −− は重量において26−50％減少 − は重量において１−25％減少 ０ は０％ 現状 ＋ は重量において１−25％増加 ＋＋ は重量において26−50％増加 ＋＋＋ は重量において51−75％増加 ＋＋＋＋ は重量において76−100％増加

【表】 明らかに、アルカラーゼ（登録商標）、オキ
アミ目甲殻類酵素及びカラフトシシヤモ酵素は
確かに壊死物質を溶解させ得るが、バリデース
（登録商標）、トリピユア（登録商標）及び生理
食塩水のようにその含水量を増加させない。し
かしながら、壊死物質へのその作用を考慮する
場合、パパイン及びパンクレアチン（登録商
標）は市販の組成物と同様の傾向、すなわち含
水量に増加による重量増加を示す。フイシンは
同様の効果を有するが、アルカラーゼ（登録商
標）、オキアミ目甲殻類酵素及びカラフシシシ
ヤモ酵素よりも弱い。 Ｃ 凝固血液の分解 凝固血液を切断し、実施例9A及びＢのよう
に準備した試験管に分配した。使用する酵素組
成物を生理食塩水中に溶解し、そうして得た組
成物の濃度（％ ｗ／ｖ）を表３に示す。12及
び24時間後に、各々分解を中止し、血液凝結ゲ
ル状物（blood coagels）を集め、秤量した。 表 ３ 各種酵素組成物の凝固血液に対する作用。 − は重量において０−25％減少 −− は重量において26−50％減少 −−− は重量において51−75％減少 −−−− は重量において76−100％減少

【表】 モ酵素
表３から、凝固血液に対して、オキアミ目甲
殻類酵素はカラフシトシシヤモ酵素に勝り、こ
れら酵素は調査されたその他の酵素よりもすぐ
れた効果を示した。 実施例 ９ 各種酵素組成物の健康皮膚への影響の研究 フイシン、パパイン、アルカラーゼ（登録商
標）、パンクレアチン（登録商標）、オキアミ目甲
殻類酵素及びカラフトシシヤモ酵素（全て濃度１
％（ｗ／ｖ）で）の各種溶液（0.3ml）を２人の
被検者の健康な皮膚に塗布し、薄い包帯で被つ
た。12時間後に皮膚上に炎症の徴候は観察されな
かつた。バリデース（登録商標）及びトリピユア
（登録商標）を用いた場合にも同様の所見が認め
られた。従つて、酵素は明らかに試験で使用した
濃度範囲で壊死組織のみを攻撃する。