JPH0662994B2 - クリーニング用酵素組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、オキアミ目（Euphausi
aceae ）又は魚類に属する動物よりなる群から選択され
た水生動物からの消化酵素及び／又は組織酵素製剤を含
有する組成物に関する。この組成物は、生物又は死物
（living or dead material ）から生物学的起源の汚染
物質又はかかる汚染物質の分解生成物を分解及び除去す
ることによって、生物又は死物をクリーニングするため
に用いられる。本発明により、前記の物質から前記の汚
染物質を除去するための方法、及び本発明により使用さ
れるべき組成物の製法も同様に提供される。

【０００２】本明細書中に使用される酵素という用語
は、他の規定のない限り、活性酵素を意味する。

【０００３】本発明は概して、哺乳動物の治療用クリー
ニング及び非−治療用クリーニングの両方に関する。従
って、クリーニングという概念は、極めて広汎な意味
で、即ち死物及び生物、例えば種々の織物，毛髪，毛
皮，皮膚，プラスチック，皮，つめ，耳，鏡，ガラス，
磁器，義歯，金属，石，歯，ファサード（facades ），
ダウン，芸術品（例えば、絵画の作品等）のクリーニン
グに使用される。クリーニングは、例えば膿（化膿性滲
出物）、繊維素（フィブリン），凝固した血液，血性痂
皮及び壊死組織のような物質を除去することによる人間
及び動物のクリーニングをも包含する。この後者の型の
クリーニングは、創傷，火傷及び皮膚病の治療のため
に、例えばいわゆる酵素的創傷清拭（enzymatic debrid
ement ）のために特に重要であるが、汚染物質が発生し
得るその他の生体領域において実施することもできる。
尿道及び膀胱が、かかるその他の領域の例である。

【０００４】動物における酵素の通常の消化作用、並び
に死後の動物におけるその自己分解作用は、クリーニン
グという用語には包含されない。

【０００５】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】（オ
キアミ目に属する）甲殻類（ krill）の中には、種々の
酵素、例えばプロティナーゼ（至適 pＨ−酸性及び中性
〜アルカリ性）、ペプチダーゼ（エクソー及びエンドペ
プチダーゼ）、リパーゼ、ホスホリパーゼ，アミラーゼ
及びその他の炭水化物分解酵素、ホスファターゼ，ヌク
レアーゼ，ヌクレオチダーゼ及びエステラーゼの混合物
が存在する（Ｔ．Ｅ．Ｅllingsen；Ｂio-kjemiske Ｓ
tudier over Ａntarktisk Ｋrill；Ｄr. ing av-handl
ing ；Ｉnstitutt for Ｔeknisk Ｂiokjemi, Ｎorge
s Ｔekniske Ｈogskole, Ｔrondheim（1982年）。オ
キアミ目甲殻類からの水抽出物中に存在する蛋白質分解
（トリプシン様）活性についての研究報告はある（Ｃ.-
Ｓ. Ｃhen et al ；Ｊ. Ｆood Ｂiochem.,第 2巻（1978
年）, 第349-66頁）。カラフトシシャモ（capelin ）か
らの水抽出物に種々のプロテアーゼ活性があることもす
でに報告されている（Ａ Ｇildberg ；Ａutolysis of
fishtissue- Ｇeneral aspects；Ｔhesis ；Ｉnstitute
of Ｆisheries, Ｕniversity of Ｔromsφ Ｎorway,
1982年）。

【０００６】1913年頃に、洗浄剤中に酵素を使用するこ
とが提案されていた。死物のクリーニング用酵素組成
物、例えば洗濯用洗剤は桿菌（Ｂacillus ）属からの種
々の微生物プロテアーゼをベースとしていた。一般に使
用されるかかるプロテアーゼの１種は、枯草菌（Ｂacil
lus subtilis）株から得られ、とりわけアルカラーゼの
商品名（Ｎovo Ｉndustri, コペンハーゲン, デンマー
ク）で市販されたサブチリシンである。種々のリパーゼ
もクリーニング用、特に脂質分解用に使用されてきた。
かかる組成物は、酵素のほかに漂白剤，例えば過硼酸塩
及び種々の陰イオン、陽イオン、及び中性洗浄剤も含有
していた。今までに使用された酵素は、一般の酵素同
様、比較的に不安定であった。

【０００７】前記の成分の、創傷清拭のために市販され
た最も重要な酵素組成物は、ストレプトキナーゼ−スト
レプトドルナーゼ（バリデース（登録商標）, Ｌederle
Ｌab.,Ａmerican Ｃyanamid Ｃompany, Ｗayne, Ｎew
Ｊersey,ＵＳＡ）、安定化された結晶化トリプシン
（トリピュア（登録商標）, Ｎovo Ｉndustri,コペンハ
ーゲン, デンマーク）及びデオキシリボヌクレアーゼと
結合した牛フィブリノリシン（エラーゼ（登録商標）,
Ｐarke Ｄevis ＆ Ｃompany, デトロイト, ミシガ
ン, ＵＳＡ）である。ストレプトキナーゼは主にＤＮＡ
への作用を介して壊死物質に作用し、ストレプトドルナ
ーゼは特異的な繊維素溶解作用を有する。トリプシンは
蛋白質分解作用を有する牛の膵臓抽出物である。フィブ
リノリシン−デオキシリボヌクレアーゼは、 2種の酵素
の組合せで、 1種は繊維素を分解する酵素，もう 1種は
膿の中の重要な 1成分であるデオキシリボ核酸に作用す
るものである。

【０００８】マロータス属 ビロズス（Ｍallotus vill
osus）（カペリン）からの特異的なペプシン様酵素（ペ
プシンＩ）の 1種が火傷の医学的治療に使用されること
が、提案された（Ｇildberg Ａ；前記参照，第 89-90
頁）。ある基質に作用する 1種の特異的な酵素を使用し
ても、創傷中に存在する汚染物質の分解には限度があ
る。しかしながら、このペプシン様酵素とその他の酵素
とを組合せて、人間の治療を目的とするクリーニングに
使用することは提案されていなかったのである。

【０００９】前記の酵素製剤には多くの欠点があった。
例えば、それらはいずれも比較的に不安定であり、保管
中か使用中に、その活性が急速に減衰する。その活性は
屡々一定の pＨ範囲、例えば中性〜中等度にアルカリ性
の pＨ範囲に限定される。それらの活性は多くの場合一
定の温度範囲に限られる。＋50℃以上の温度で活性は急
速に損失し、室温又は通常の戸外温度ではその活性は低
い。

【００１０】バリデース（登録商標）、トリピュア（登
録商標）及びエラーゼ（登録商標）の効果は、その目的
のためには比較的不十分である。中程度の創傷清拭作用
が通常 3週間にわたる治療期間後に達成されるだけであ
る。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明の 1つの目的によ
り、前記の欠点に関して改善されたクリーニング用組成
物が提供される。第二の目的により、生物学的起源の物
質又はかかる物質からの分解生成物を含有する汚染物
質、特に蛋白質及び脂質の両方を含有する汚染物質を除
去すべく使用されるべき改善された組成物の製法が提供
される。第三の目的により、前記の汚染物質から生物又
は死物をクリーニングするための新規な改良方法、特に
繊維素、凝固血液及び失活組織の成分を分解し、かつそ
れによりそれらの含水量を殆んど増加させずに除去し易
くさせることによって、繊維素、凝固血液及び失活組織
の創傷清拭のための新規な改良方法が提供される。従っ
て、本発明は従来の組成物よりもより有効な酵素を有す
る組成物をベースとしている。これは、当該汚染物質へ
の全ての酵素作用に有効である。

【００１２】これらの目的は、生物学的起源の汚染物質
を溶解し得かつ上記に挙げた動物から取り出される酵素
製剤を有効量含有する組成物を使用することによって達
成される。それらの動物からの酵素混合物は高収率で簡
単に得ることができる。目下のところ、酵素製剤のため
の最も好ましく有用な供給源は、オキアミ目、例えば南
極オキアミ目甲殻類（Ｅuphausia superba）, Ｅupha
usia crystallorophias, 及び関連種、並びにＭeganyc
tiphanes norvegica, Ｔysanoessa inermis 及びそ
の他の関連種を含めたその他の種のオキアミ目甲殻類で
ある。魚類の中では、Ｍallotus 属特にＭallotus vil
losus （カラフトシシャモ）種の魚類が本発明では好ま
しい。その他としては、サバが挙げられる。

【００１３】本発明のための最も重要な酵素活性は、動
物の消化管から派生するようである。動物から得られる
種々の酵素活性が複雑に混合されているために、その組
成物がそれらの起源に係わりなく、生物学的な汚染物質
を極めて急速に分解させ得るのであろう。酵素は、アル
カリ性，中性，かつ酸性媒体中で活性を示し、種々の界
面活性剤（張力剤及び乳化剤）、及び／又はその他の成
分、例えば担体及び添加物と一緒に、クリーニング組成
物中に使用され得る。

【００１４】組成物が酵素の混合物を含有し得るからこ
そ、脂質，燐脂質，バイオポリマー（例えば蛋白質，ペ
プチド，核酸，ムコ多糖類，及び多糖類）、並びにかか
る化合物の分解生成物よりなる群から選択された物質の
混合物を含有する汚染物質の除去にこの組成物が有用な
のである。これらの化合物は、膿、血液痂皮及び壊死組
織中に存在する。

【００１５】本発明によれば、使用する酵素が 15000〜
80000 ダルトンの範囲の分子量を有するか、又はかかる
酵素の活性凝集体を有する場合に、特に良好な結果が得
られる。殊に、分子量約 20000〜約 40000ダルトンを有
する酵素が有利である。これらの範囲は、動物をホモジ
ナイズし水抽出して得られる酵素、すなわち殊に抽出中
に水にとける酵素にあてはまる。得られる酵素製剤は蛋
白質分解酵素、エキソ−及びエンド−ペプチダーゼ混合
物等を含有する。

【００１６】本発明の 1つの実施態様は、新規な酵素ク
リーニング組成物及びその製法に関する。その方法は、
オキアミ目の動物、又は魚類から産出された酵素製剤
を、 1種又はそれ以上の水不溶性、又は水溶性の水性又
は非水性担体に、必要な場合には適当な添加物と一緒
に、混合、溶解、結合又はさもなくば組合せることを特
徴とする。新規組成物は軟膏，粉末，パスタ剤，クリー
ム，スプレー，ゲル，リニメント剤，バンデージ，油状
物，錠剤，シロップ，顆粒，カプセル，錠剤等の形態で
あればよい。

【００１７】緩衝物質、単一溶剤としての水、及び当該
動物からの酵素製剤のみより成るある非殺菌性均質水溶
液は、新規組成物の概念からは除外される。かかる水溶
液は前記の刊行物中に記載されている。同様のことが添
加物を含有しない凍結乾燥した水抽出物にもあてはま
る。

【００１８】現在最も有利な実施態様では、使用する製
剤中の酵素は水溶性で及び／又は前記範囲内の分子量を
有する。

【００１９】本発明はまた、生物又は死物からの生物学
的汚染物質を、例えば酵素的創傷清拭により除去するた
めの方法に関する。本方法は、前記の物質上に存在する
かかる汚染物質を、前記の動物から取り出した有効量の
酵素、例えば蛋白質分解及び／又は脂肪分解に有効な量
の酵素を含有する酵素組成物と接触させ、その後に、組
成物を分解又は溶解した汚染物質と共に前記物質から除
去することを特徴とする。現在最も有利な実施態様にお
いては、本方法は分子量約 15000〜約 80000ダルトンを
有する酵素（その活性凝集体を包含する）又はかかる酵
素の活性凝集体を使用する。特に、分子量約 20000〜約
40000ダルトンの酵素が好ましい。例えば膿，血液痂皮
及び壊死組織の如き失活物質、及び繊維素又は凝固血液
の除去には極めて有利である。これは、それらの物質を
生存組織から除去する場合に特に有効である。

【００２０】汚染物質を分解及び／又は溶解させるのに
必要な期間は、場合により変化するが、酵素が汚染物質
を分解及び／又は溶解させるのに十分な時間を選択すべ
きである。必要ならばこの処置を繰り返してもよい。

【００２１】使用する酵素製剤は、例えば前記したタイ
プの種々の酵素を広範囲に含有させてもよい。本発明に
よれば、組成物中の 1種又はそれ以上の酵素がそれ自体
公知の方法、例えばある酵素に対して特異的な阻害剤を
添加することにより、又は当該酵素を除去することによ
り除去された組成物を使用することが可能である。

【００２２】至適温度での蛋白質分解活性は、 pＨ5-10
の範囲で高い。至適 pＨは7-9 である。良好な蛋白質分
解活性のための温度範囲は 25-70℃であり、至適温度範
囲は30-55℃である。活性は 0℃に下っても維持されて
いる。

【００２３】前記の温度及び pＨ範囲は本発明の種々の
適用に全て用いられ得るが、その他の範囲を用いても実
施可能である。

【００２４】動物からの酵素の調製は公知の方法により
行なわれる。例えば、新鮮な又は新鮮な凍結動物をホモ
ジナイズし(homogenize)、水性媒体（例えば水）で抽出
してもよい。得られた抽出物を凍結乾燥し、貯蔵しても
よい。抽出物を更に、例えば脂質を抽出する為に脂質溶
解溶剤で抽出して精製することができる。それ以上の精
製を必要とする場合には、ゲル濾過、限外濾過又は膜濾
過を実施することができる。利用可能なその他の精製工
程は、イオン交換及びアフィニティーカラムクロマトグ
ラィーである。抽出及びホモジナイゼーションは＋５℃
以下又は＋５℃近くの冷所で実施すべきである。

【００２５】水抽出して得られた酵素製剤を直接又は、
必要ならば、更に精製した後に使用すればよい。殆んど
の場合、脂質が抽出された後の製剤を凍結乾燥すること
が有利である。そのような場合には、得られる粉末を長
時間貯蔵することができる。各適用分野で、特異的組成
物又はその形態が要求される。かかる形態はそれ自体公
知である。従って本発明は、種々の形態、例えば凍結乾
燥酵素、均質水溶液の形態の酵素組成物または又は前記
しかつ新規であると請求した酵素組成物に関する。各組
成物中の酵素の正確な量は場合に応じて−純粋な凍結乾
燥した抽出物の場合から極めて複雑な洗浄組成物の場合
まで−変化する。酵素の量は、汚染物質が除去されるべ
き物質に悪影響を与えることなく、意図する汚染物質を
分解及び／又は溶解させるのに十分な量でなくてはなら
ない。新規なクリーニング組成物中のその他の成分は、
組成物を使用するに必要な条件下で悪影響を与えること
のないように、選択されなければならない。

【００２６】最終組成物中に存在する酵素製剤の量は0.
0001％（ w／w ）乃至 100％である。プロテアーゼ活性
に関しては、最終組成物は1mg 当り0.0001乃至 0.1の酵
素単位を含有してよい。使用する酵素製剤の純度に依
り、前記範囲外が適用されてもよい。前記の酵素単位
は、基質としてカゼインを用い 1分間当りのチロシン当
量μモルとして示される。

【００２７】本発明の組成物中には種々の添加物及び担
体が配合され得る。適当な担体（carrier ）は、無菌
の、水性及び生理学的に許容され得る塩溶液、有機及び
無機ゲル形成物質（例えば重合体）、シリコーン油及び
組成物に所望の物理的特性を与えるその他の物質及びそ
れらの混合物がよい。添加物としては、殺菌剤，香料，
種々の陰イオン，陽イオン，両性イオン、及び中性界面
活性剤（張力剤（tensides）及び乳化剤）が挙げられ
る。かかる成分はそれ自体、洗濯及び酵素的創傷清拭用
酵素組成物に関連してすでに公知である（例えば参照文
献としてのドイツ国特許出願第 2130833号明細書、英国
特許第 1280497号明細書、同第1296901 号明細書及び同
第 1573964号明細書、及び米国特許第3627688 号明細
書、同第 3855142号明細書、同第 4212761号明細書、同
第 4243546号明細書、同第 4242219号明細書、同第4287
082 号明細書、同第 4305837号明細書及び同第 4307081
号明細書参照）。創傷した生存組織の治療のために、生
理学的かつ製薬学的に許容され得る担体を含有するか、
又は全く担体を含有しない組成物を使用することが有利
である。かかる組成物は無菌であってもよい。滅菌は、
例えば組成物が溶液である場合には滅菌濾過により実施
することができる。無菌組成物は無菌条件下で無菌成分
を混合することによっても得ることができる。

【００２８】

【実施例】以下に、本発明を非限定的種々の実施例につ
き説明する。

【００２９】実施例１Ａ．オキアミ目甲殻類（Krill ）抽出物の調製 南極の夏期に捕え、直ちに冷凍し、約−80℃で約 2年間
貯蔵したオキアミ目甲殻類（Ｅuphausia superba）を、
約＋５℃の室内に置く。オキアミ目甲殻類がほとんど解
凍した時に、オキアミ目甲殻類25g を温度 0℃の脱イオ
ン水50mlと混合する。混合物をホモジナイズし、次いで
冷所（約 0℃）で 1時間半12500gで遠心分離にかける。
赤色上清を傾瀉後、保存する。沈澱物を脱イオン水50ml
中に再懸濁し、前記と同様に遠心分離にかける。新たな
上清を傾瀉し、最初の抽出からの上清と合わせる。

【００３０】抽出物から脂質を除去するために、ＣＣｌ
₄ 20mlを、合した上清に加え、冷所（ 0℃）でホモジ
ナイズする。混合物を冷所で2500g で15分間遠心分離す
る。水相を除去し、もう一度ＣＣｌ₄ で抽出し、前記と
同様に遠心分離にかける。水相を１Ｂで使用するが、こ
こで水相は水抽出物として示されている。

【００３１】Ｂ．ゲルクロマトグラフィーによる追加精
製 Ａからの水抽出物20mlを、直径 3.1cm及び高さ69cmのカ
ラムに充填したセファデックス Ｇ-100（エピクロロヒ
ドリンで架橋されたデキストラン，ＰharmaciaＦine Ｃ
hemicals ＡＢ，Ｕppsala，Ｓweden ）を用いてクロマ
トグラフ処理する。カラムを平衡化し、トリス−ＨＣｌ
緩衝液（0.05Ｍ、 pＨ 7.5）を用いて＋ 5℃で溶離させ
る（１時間あたり30ml）。画分を集める。溶離曲線を、
２８０ｎｍのＵＶ吸収を測定することにより分光学的に
モニターし、各画分の蛋白質分解活性を測定する。酵素
活性な画分を集め、脱イオン水で透析する。最後に集め
た画分を凍結乾燥したものを、本発明により使用する。

【００３２】画分中及び凍結乾燥調製物中の蛋白質分解
活性を、基質としてヘモグロビン及び／又はカゼインを
用い、測定する（Ｒｉｃｋ Ｗ．Ｉ．；Ｍethods of Ｅ
nzymaticanalysis；Ｅd Ｂergmeyer，ＨＵ；第 2巻、第
1013-23頁（1974年）；Ａcademic Ｐress Ｎew Ｙor
k ）。ゲルクロマトグラフィーを実施すると、酵素活性
は分子量 20000-40000ダルトンに相当する画分から主に
回収される。

【００３３】実施例２カラフトシシャモ抽出物の調製 9月にフィンマルク（ノルウェー）沖で捕えたカラフト
シシャモ（Ｍallotusvillosus）を冷凍し、−20℃で 1
年間貯蔵した。その後、冷凍カラフトシシャモを 5℃に
置いた。24時間後に、消化管を含む腸を、部分解凍した
カラフトシシャモから取り出した。腸 25gを脱イオン水
50mlと混合し、 0℃でホモジナイズした。続いて、混合
物を12500gで 1時間半遠心分離にかけた。いくらか濁っ
ている上清を傾瀉し、集める。沈澱物を脱イオン水50ml
中に再び懸濁し、前記と同様に遠心分離する。新しい上
清を傾瀉し、最初の抽出からの上清と合わせる。

【００３４】抽出物から脂質を除去する為に、ＣＣｌ₄
20mlを、合した上清に加え、冷所（0℃）でホモジナイ
ズした。混合物を冷所で2500g で15分間遠心分離にかけ
た。水相を取り除き、もう一度四塩化炭素で抽出し、前
記と同様に遠心分離にかけた。最後に水相を凍結乾燥し
た。

【００３５】実施例３Ｍallotus villosus からの酵素を含有する組成物 Ａ．（実施例２からの）カラフトシシャモからの凍結乾
燥酵素製剤10mgを、酢酸カルシウム 0.4mg及び amylum
resorb（Ｂiosorb（登録商標）；Ａrbrook, Ｋirkton
Ｃampus, Ｌivingston, Ｓcotl and）と混合する（全
量1g）。

【００３６】そうして得た均質粉末を生理食塩溶液（sa
line） 10g中で攪拌し、湿性包帯に使用することができ
る。

【００３７】Ｂ．（実施例２からの）凍結乾燥カラフト
シシャモ製剤10mgを、ポリエチレングリコールゲル（Ｍ
acrogol 600及びＭacrogol 800（Hoechst, Federal R
epublic of Germany）を等量含有する）と混合する（全
量1g）。半固体で、均質の濃度を有する１％酵素組成物
が得られる。

【００３８】実施例４溶液中にオキアミ目甲殻類酵素を含有する組成物 （実施例１Ｂからの）凍結乾燥酵素製剤10mgを酢酸カル
シウム 0.4mg及びamylum resorb と混合する（全量1
g）。そうして得た均質粉末を生理食塩溶液 10gと振り
混ぜ、得られる組成物を、寸法 3×3cm で 4層のガーゼ
からなる滅菌湿布を浸すために使用する。湿らした湿布
は壊死創傷の治療に用いられる。湿布をはり付けるため
に、ガーゼを湿布のまわりに 2回巻く。この包帯にそれ
から更に絆創膏をはり付ける。湿布を 4時間毎に組成物
で浸す。創傷を被う湿布のその部分に限定して適用する
ために、目の大きい尖を有する注入用力ニューレを用い
て混合物を施こす。 1日に 1回、包帯全体をとり除き、
新しい包帯に替える。この処理で、分解し崩壊した壊死
部分は機械的に除去されるはずである。実施した特異的
処理で、創傷は 1週間後にきれいになった。

【００３９】実施例５壊死物質に対するオキアミ目甲殻類酵素の作用 ヒトの皮膚上にある壊死成分に対するオキアミ目甲殻類
酵素の作用を試験するために、次の実験を行った：2人
のヒトの右手の上側の無傷皮膚上に、壊死物質を塗布し
た。壊死物質は足の創傷からのものであった。壊死物質
は失活コラーゲン組織，凝固血液，繊維素，膿及び痂皮
よりなっていた。各人に塗布した量は0.5gであった。

【００４０】各人上の壊死物質を、実施例４と同様に製
造したオキアミ目甲殻類酵素組成物で浸した湿布（面積
10cm² ）で被った。各湿布をガーゼで被った。 4時間後
に、両方の湿布ともほとんど完全に乾燥し、そのために
より多量の酵素組成物を加えなければならなかった。12
時間後に湿布をとり除き、各手の上に残っている壊死物
質を別々に秤量した。壊死物質は特有の分解徴候を示
し、その重量は約25％減少した。試験中、壊死物質と接
触していた皮膚は影響をうけなかった。被検者に負の症
状は認められなかった。

【００４１】実施例６小壊死創傷のある人間への生体内試験 右の人指し指に壊死物質を含む小潰瘍を有する人間に、
5日間にわたり毎日、（実施例４のように製造した） 1
％オキアミ目甲殻類酵素溶液を適用した。創傷面は酵素
組成物に十分に許容性を示し、清浄化及び上皮形成化へ
の著しい傾向を示した。副作用は認められなかった。

【００４２】実施例７両性界面活性剤と組合せたオキアミ目甲殻類酵素による
多脂質性脂漏皮膚に対するクリーニング効果 アルキルイミダゾリン 18.00％（ w／w ），ラウリルー
ポリペプチド縮合物1.90％（ w／w ），ウンデシレニル
ーポリペプチド縮合物1.70％（ w／w ），脂肪物質（ラ
ノリン）で緩衝した変性アルキルエーテルサルフェート
28.00％（ w／w ），ココナッツ−アミンサルコシネー
ト1.40％（ w／w ），ウンデシレン酸1.90％（ w／w
），ウンデシレンーモノエタノールアミドスルホスク
シネート2.00％（ w／w ）， pＨ 6.4、乳酸十分量及び
2度蒸溜した（aqua bi dest）水よりなる常用の洗浄剤
（全量100.00％（ w／w ））を使用した。

【００４３】（実施例１Ｂからの）凍結乾燥したオキア
ミ目甲殻類酵素製剤を適量洗浄剤に加え、 1％（ w／w
）酵素洗浄剤組成物を生ぜしめた。胸骨部に明らかな
油性脂漏を有する 2名の人間の胸骨部の皮膚面10cm² を
試験のために選んだ。それらの面を 1日 2回、 5日間に
わたり酵素洗浄剤組成物で洗った。同じ面からのサンプ
ルを洗浄期間の前後に採取した。サンプルを集め、Ｓch
aeffer Ｈ及びＫuhn −Ｂussius Ｈ. （Ａrch. Ｋli
n. u. exper. Ｄer- malol., 第 238巻、（1970年）第
429頁）に準じて、光度計で分析した。

【００４４】結果は 2被検者の両方で、透過値の著しい
低下を示した。従って、このことは、使用した酵素組成
物による皮膚の脂質の分解を示す。これに対して、 2名
の人間が酵素を含まない洗浄剤のみを使用した場合に
は、極めて僅かしか効果が得られなかった。

【００４５】実施例８織物に対する比較洗浄実験：Ｅ． superba（オキアミ目
甲殻類）由来の酵素アルカラーゼ（登録商標）と蒸溜水
との比較 布の均質部分から同じ布片（ 5×5cm ）を切り取った。
布は二重であり、一方の側は絹で、他方の側は木綿及び
合成繊維の混合物よりなる織物であった。布片6枚を血
液で汚し、 6枚を牛乳で汚し、 6枚を墨で汚した。エル
レンマイヤーフラスコ 6個の各々に、凍結乾燥したオキ
アミ目甲殻類酵素の水溶液(0.5％ w／w) 100ml を加え
た（凍結乾燥したオキアミ目甲殻類酵素は実施例１Ｂか
ら得た）。他の 6個のエルレンマイヤーフラスコの各々
に、 0.5％（ w／w ）アルカラーゼ（登録商標）（Ｎov
o Ｉndustri, コペンハーゲン, デンマーク）蒸溜水溶
液100mlを加えた。別の 6個のエルレンマイヤーフラス
コには蒸溜水100ml を加えた。

【００４６】オキアミ目甲殻類酵素溶液を含有する 2個
のフラスコ、アルカラーゼ溶液を含有する 2個のフラス
コ、及び蒸溜水を含有する 2個のフラスコの各々に、血
液で汚した布片の一枚を加えた。同様に、一枚の布片が
各フラスコ内に存在するように、その他の汚れた布片を
残りのフラスコに加えた。このことは、各組成物を血
液、牛乳および墨で汚れた布に重複して作用させること
を意味する。その後、フラスコを振盪する水浴上で 1時
間、＋45℃で攪拌した。この処理後に、洗浄液を傾瀉
し、蒸溜水 100mlを各フラスコに加えた。次いでフラス
コをゴム栓で封閉し、 1分間激しく攪拌した。次いで布
片を集め、水道水流水中で10分間ゆっくり洗浄した。布
片をきれいな白色タオルにはさみ、乾燥した。

【００４７】洗浄の効果、すなわち布の明るさは、二重
盲検により調べた。つまり試験者には各断片がどの洗浄
組成物で処理されたかを知らせずに、洗浄効果、すなわ
ち、布の明るさ及び清潔さを視覚的に評価させた； 0＝
完全にきれいな布； 1＝僅少量の汚染残留； 2＝中庸量
の残留汚染； 3＝著しい量の汚染残留。洗浄結果を表１
に示す。

【００４８】表１ 0.5％（ w／v ）オキアミ目甲殻類酵素蒸溜水溶液； 0.
5％（ w／v ）アルカラーゼ（登録商標）蒸溜水溶液；
酵素非含有蒸溜水の洗浄効果

【００４９】

【表１】

【００５０】表１から、オキアミ目甲殻類由来の酵素組
成物がアルカラーゼ又は蒸溜水よりも効果があることが
判る。

【００５１】同様の試験はカラフトシシャモ酵素を含有
する類似組成物で行なうことができる。

【００５２】実施例９繊維素、壊死物質及び凝固血液の分解 Ａ．繊維素（Fibrin） 繊維素を、重量 0.2-0.3g の断片数枚に切りはなした。
使用する各酵素組成物のために、試験管20本に番号をつ
け、その各々に前もって重量をはかっておいた繊維素片
を加えた。各組成物の試験管20本に、等量の酵素組成物
を加えた。バリデース（登録商標）を蒸溜水中で 1：20
（ w／v ，市販製剤に基づく）の希釈度で使用した。ト
リピュア（登録商標）（Ｔrypure）を生理食塩水中で
1：15（ w／v ，市販製剤に基づく）の濃度で使用し
た。その他の酵素製剤は生理食塩水で希釈し、そうして
得た組成物の濃度は表２に示されている。使用するオキ
アミ目甲殻類酵素及びカラフトシシャモ酵素は、夫々実
施例１Ｂ及び２に従って得られた凍結乾燥製剤であっ
た。研究は、創傷温度と同じである温度＋33℃で行なっ
た。12時間及び24時間後に各々反応を中止し、残留する
繊維素を集め、湿った濾紙上に60秒間保持し、秤量し
た。パパイン，フィシン及びパンクレアチンは全て、
Ｅ．Ｍerck, Ｄarmstadt, Ｇermanyから入手した。

【００５３】表２ 繊維素に対する各種酵素組成物の作用 濃度は％ w／v で示した。

【００５４】 − は重量において 0- 25 ％減少 −− は重量において 26- 50 ％減少 −−− は重量において 51- 75 ％減少 −−−− は重量において 76-100 ％減少

【００５５】

【表２】

【００５６】繊維素は、オキアミ目甲殻類酵素，カラフ
トシシャモ酵素及びトリピュア（登録商標）を含有する
組成物により上記順番で最も短い時間で、溶解した。バ
リデース（登録商標）及びアルカラーゼ（登録商標）は
フィシンと同程度で、パパインは最も弱い効果を有し
た。

【００５７】Ｂ．壊死物質の分解 壊死物質（necroses）を 0.2-0.3g の断片に切った。使
用する各酵素組成物のために、試験管20本に番号をつ
け、これらの管の各々に前もって重量を測っておいた壊
死物質片を加えた。各組成物の試験管20本に、当量の各
酵素組成物を加えた。使用する組成物を表３に示し、そ
れらの濃度を生理食塩水中％（ w／v ）として示す。バ
リデース（登録商標）及びトリピュアを実施例８Ａに従
って希釈した。12,24,36及び72時間経過後に、分解を中
止し、壊死物質を集め、重量を測った。

【００５８】表３ 各種酵素組成物の壊死物質に対する作用 濃度（％）は w／v を基に計算する。

【００５９】 −−−− は重量において 76-100 ％減少 −−− は重量において 51- 75 ％減少 −− は重量において 26- 50 ％減少 − は重量において 1- 25 ％減少 0 は 0％ 現状 ＋ は重量において 1- 25 ％増加 ＋＋ は重量において 25- 50 ％増加 ＋＋＋ は重量において 51- 75 ％増加 ＋＋＋＋ は重量において 75-100 ％増加

【００６０】

【表３】

【００６１】明らかに、アルカラーゼ（登録商標）、オ
キアミ目甲殻類酵素及びカラフトシシャモ酵素は確かに
壊死物質を溶解させ得るが、バリデース（登録商標）、
トリピュア（登録商標）及び生理食塩水のようにその含
水量を増加させない。しかしながら、壊死物質へのその
作用を考慮する場合、パパイン及びパンクレアチン（登
録商標）は市販の組成物と同様の傾向、すなわち含水量
の増加による重量増加を示す。フィシンは同様の効果を
有するが、アルカラーゼ（登録商標），オキアミ目甲殻
類酵素及びカラフシシシャモ酵素よりも弱い。

【００６２】Ｃ．凝固血液の分解 凝固血液を切断し、実施例９Ａ及びＢのように準備した
試験管に分配した。使用する酵素組成物を生理食塩水中
に溶解し、そうして得た組成物の濃度（％ w／v ）を表
４に示す。12及び24時間後に、各々分解を中止し、血液
凝結ゲル状物（blood coagels ）を集め、秤量した。

【００６３】表４ 各種酵素組成物の凝固血液に対する作用 − は重量において 0- 25 ％減少 −− は重量において 26- 50 ％減少 −−− は重量において 51- 75 ％減少 −−−− は重量において 76-100 ％減少

【００６４】

【表４】

【００６５】表４から、凝固血液に対して、オキアミ目
甲殻類酵素はカラフシトシシャモ酵素に勝り、これら酵
素は調査されたその他の酵素よりもすぐれた効果を示し
た。

【００６６】実施例10各種酵素組成物の健康皮膚への影響の研究 フィシン，パパイン，アルカラーゼ（登録商標），パン
クレアチン（登録商標），オキアミ目甲殻類酵素及びカ
ラフトシシャモ酵素（全て濃度 1％（ w／v ）で）の各
種溶液（ 0.3ml）を 2人の被検者の健康な皮膚に塗布
し、薄い包帯で被った。12時間後に皮膚上に炎症の徴候
は観察されなかった。バリデース（登録商標）及びトリ
ピュア（登録商標）を用いた場合にも同様の所見が認め
られた。従って、酵素は明らかに試験で使用した濃度範
囲で壊死組織のみを攻撃する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ラルス・グスターヴ・インゲ・ヘルグレン スウエーデン国、エス−421 63・ヴエス トラ・フレルンダ、ブロンスユータルガー タン・13 (72)発明者 ヴイゴ・モール ノールウエー国、エヌ−7000・トロンダイ ム、セント・ヨールゲンスヴエータ・６・ アー (72)発明者 ヤン・グスターヴ・ヴインセント スウエーデン国、エス−114 47・ストツ クホルム、リンネガータン・31

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 オキアミ目に属する動物から単離された
   エキソ−及びエンド−ペプチダーゼ混合物含有酵素製剤
   を含む、非治療用クリーニング剤として使用するための
   組成物。
2. 【請求項２】 酵素がホモジナイズした動物から水性抽
   出により単離されることを特徴とする請求項１に記載の
   組成物。
3. 【請求項３】 酵素が約15,000〜80,000ダルトンの分子
   量を有するか又はかかる酵素の活性凝集体であることを
   特徴とする請求項１又は２に記載の組成物。
4. 【請求項４】 酵素がさらに蛋白質分解酵素を含有する
   ことを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の
   組成物。
5. 【請求項５】 生物学的汚染物質の除去に使用すること
   を特徴とする請求項１に記載の組成物。
6. 【請求項６】 汚染物質が蛋白質を含むことを特徴とす
   る請求項５に記載の組成物。
7. 【請求項７】 担体及び／又は添加物をさらに含むこと
   を特徴とする請求項１に記載の組成物。
8. 【請求項８】 １種若しくはそれ以上の界面活性剤をさ
   らに含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
9. 【請求項９】 クリーム，スプレー，粉末，ゲル，オイ
   ル，又は液剤として処方されることを特徴とする請求項
   １に記載の組成物。