【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
〔産業上の利用分野〕
本発明は、新規な外用剤組成物に関し、更に詳
しくは、チユーベローズ（Polianthes tuberosa
L.）より組織培養法によつて得られる酸性ヘテロ
多糖類を配合し、皮膚の保湿効果、保護効果およ
び柔軟・平滑化などの効果に優れた皮膚、毛髪用
化粧料、外用医薬品等の外用剤組成物に関する。
〔従来の技術及びその課題〕
従来、外用剤、特に化粧料用保湿剤としては、
グリセリン、ソルビトール等の低分子量物質、ピ
ロリドンカルボン酸ナトリウム等のNMF（天然
保湿因子）成分などが用いられてきたが、近年、
ムコ多糖類をはじめとする生体高分子物質や種々
の植物抽出物が保湿剤として利用されている。し
かしながら、植物由来の多糖類は増粘剤、ゲル化
剤等として用いられているように、保湿機能を発
揮するのに十分な量を用いると系が増粘し、肌へ
の感触が悪くなる等の欠点があつた。
一方、ポリアンテス属に属する植物、特にチユ
ーベローズは、その油性成分が香料として利用さ
れているが、組織培養法によつて得られる水溶性
成分については報告されておらず、また、外用
剤、化粧料等に応用された例もない。
〔課題を解決するための手段〕
斯かる実状において、本発明者らは鋭意研究を
行つた結果、チユーベローズ由来の成分、就中、
組織培養法により得られる、水溶性成分である酸
性ヘテロ多糖類を配合した外用剤は、高保湿効
果・高平滑効果とともに、滑らかな使用感を有す
ることを見出し本発明を完成した。
すなわち、本発明は、ポリアンテス属
（Polianthes L.）に属する植物より得られる、ア
ラビノース、マンノース、ガラクトース、キシロ
ースおよびグルクロン酸を構成成分とする酸性ヘ
テロ多糖類を含有することを特徴とする外用剤組
成物を提供するものである。
本発明において用いるチユーベローズ由来の酸
性ヘテロ多糖類は、例えば以下の方法により得る
ことができる。
組織培養法：
チユーベローズの花等の一部を外植片とし、基
本培地に植物ホルモンと炭素源としての糖を加え
た培地を用いてカルスを誘導する。このカルスを
さらに液体培地にうつして振とう培養し、この培
養物から細胞を遠沈またはろ過によつて除去した
のち、濃縮し、濃縮液にエタノールを加えて沈澱
させ、沈澱物を凍結乾燥することにより酸性ヘテ
ロ多糖類を得る。
本方法では、外植片として、チユーベローズは
その花、茎、葉、鱗茎、根等の器官又は組織の一
部が使用されるが、就中特に花の一部が好まし
い。
カルス誘導用の基本培地としては、植物組織培
養に通常用いられるMurasige−Skoogの培地、
Linsmaier−Skoogの培地、Gamborgの培地、
Whiteの培地、Tuleckeの培地、Nitsch ＆
Nitschの培地などが用いられうる。
この基本培地には植物ホルモンを添加する必要
があり、植物ホルモンとしては、２，４−ジクロ
ロフエノキシ酢酸（２，４−Ｄ）、α−ナフタレ
ン酢酸（NAA）、インドール酢酸（IAA）、イン
ドール酪酸（IBA）等のオーキシン類；フルフリ
ルアミノプリン（カイネチン）、ベンジルアデニ
ン（BA）、ジメチルアミノプリン（2iP）等のサ
イトカイニン類が挙げられる。その中でも、２，
４−Ｄ単独、もしくはNAAとBAの組合わせ、
またはNAAとカイネチンの組合わせが良好な結
果を与える。カルス誘導に必要な植物ホルモン濃
度は、２，４−Ｄ単独の場合は５×10-4Mから１
×10-7M、NAAとBAまたはNAAとカイネチン
の組合わせの場合は、NAAの濃度は５×10-4M
から１×10-7M、BAまたはカイネチンの濃度は
１×10-4Mから１×10-7Mである。
カルス誘導培地には上記の基本培地と植物ホル
モンのほかに炭素源として糖が加えられる。糖と
しては、グルコース、フラクトース、マンノー
ス、キシロース、サツカロース、ラムノース、フ
コース、デンプンなどが挙げられるが、通常はサ
ツカロースが用いられる。
カルス誘導は固体培地でも液体培地でも可能で
あるが、通常は固体培地が用いられる。
誘導されたカルスは上記のカルス誘導培地で同
じ形態を維持したまま10代以上にわたつて継代培
養をすることができる。継代培養用の培地として
は、通常基本培地としてLinsmaier−Skoogの培
地、Murasige−Skoogの培地、植物ホルモンと
して１×10-4〜１×10-7Mの２，４−Ｄまたは１
×10-4〜１×10-7MのNAAと１×10-4〜１×
10-7MのBA、炭素源としては、グルコース、フ
ラクトース、マンノース、キシロース、サツカロ
ース、ラムノース、フコース、デンプン等が用い
られるが、就中サツカロースが好ましく、その添
加量は１〜６％が好ましい。
カルスから多糖類を製造するには、カルスを寒
天培地等の固体培地、液体培地で培養するが、就
中液体培地で培養するのが好ましい。
基本培地としてはカルス誘導培地と同じもの、
例えばMurasige−Skoogの培地、Linsmaier−
Skoogの培地、Gamborgの培地、Whiteの培地、
Tuleckeの培地、Nitsch ＆ Nitschの培地など
が用いられうるが、就中Murasige−Skoogの培
地、Linsmier−Skoogの培地が好ましい。
植物ホルモンの種類及び濃度は多糖類の生産性
に関係があり、例えば２，４−Ｄ、NAA、
IAA、IBA等のオーキシン類；カイネチン、
BA、2iP等のサイトカイニン類；ジベレリンA3
（GA3）等のジベレリン類等が使用される。この
中で、２，４−Ｄ、NAAを単独で、または
NAAとBAもしくはカイネチンを組合わせて用
いるのが好ましい。その濃度は、２，４−Ｄ又は
NAAを単独で用いる場合は５×10-4Mから１×
10-7M、特に５×10-5Mから５×10-6Mが；
NAAとBAまたはNAAとカイネチンを組合わせ
て用いる場合には、NAAの濃度は１×10-4Mか
ら１×10-7M、特に１×10-4Mから５×10-6M、
BAまたはカイネチンの濃度は５×10-5Mから１
×10-9M、特に１×10-5Mから１×10-7Mが好ま
しい。
炭素源としては、グルコース、フラクトース、
マンノース、キシロース、サツカロース、ラムノ
ース、フコース、デンプンなどが用いられる。多
糖類の生産は添加する炭素源の種類にはあまり強
く影響されるものではなく、通常サツカロースが
用いられる。炭素源の濃度の多糖類の生産量との
間にもあまり深い関係はないが、一般には１〜６
％が好ましい。
培養法は特に制限されないが、通常、20〜30℃
の温度で15〜30日間行うのが好ましく、また振と
う培養が好ましい。
このようにして得られた培養物から多糖類を採
取するには、例えば培養物から細胞を遠沈又はろ
過等によつて除去したのち、培養液をロータリー
エバポレーター等を用いて濃縮し、濃縮液にエタ
ノールを加えて沈澱させ、沈澱物を凍結乾燥する
ことによつて行われる。
本発明の外用剤組成物に配合する酸性ヘテロ多
糖類の量は0.0001〜10重量％（以下「％」で示
す）、好ましくは0.001〜５％である。この配合量
が0.0001％未満では、その効果が充分発揮されず
好ましくない。
本発明の外用剤組成物は、その使用形態におい
て、薬用皮膚外用剤と化粧料に大別される。
薬用皮膚外用剤としては、例えば薬効成分を含
有する各種軟膏剤を挙げることができる。軟膏剤
としては、油性基剤をベースとするもの、油／
水、水／油型の乳化系基剤をベースとするものの
いずれであつてもよい。薬効成分としては、特に
制限はなく、例えば鎮痛消炎剤、鎮痒剤、殺菌消
毒剤、収斂剤、皮膚軟化剤、ホルモン剤等を必要
に応じて適宜使用することができる。
また、化粧料としては、種々の形態、例えば
水／油、油／水型乳化化粧料、クリーム、化粧乳
液、化粧水、油性化粧料、口紅、フアウンデーシ
ヨン、ヘアートニツク、整髪剤、養毛剤、育毛剤
等の皮膚化粧料とすることができる。
これらの外用剤の調製に当り、好適に用いられ
る油としては、例えば流動パラフイン、パラフイ
ンワツクス、セレシン、スクワラン等の炭化水
素；密ロウ、鯨ロウ、カルナバロウなどのワツク
ス類；オリーブ油、椿油、ホホバ油、ラノリンな
どの天然動植物油脂；シリコーン油、脂肪酸、高
級アルコールおよびこれらを反応して得られるエ
ステル油等が挙げられる。
また、界面活性剤としては、ポリオキシエチレ
ンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸
エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸
エステル、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪
酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油ア
ルキル硫酸エステル、ポリオキシエチレンアルキ
ル硫酸エステル、アルキルリン酸エステル、ポリ
オキシエチレンアルキルリン酸エステル、脂肪酸
アルカリ金属塩、ソルビタン脂肪酸エステル、グ
リセリン脂肪酸エステル等が用いられる。また、
本発明の乳化組成物には更に各種任意成分を配合
することができ、例えば粘度調整剤としてポリビ
ニルアルコール、カルボキシビニルポリマー、カ
ルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリド
ン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロ
ースなどの高分子化合物；ゼラチン、タラカント
ガムなどの天然ガム類；エタノール、イソプロパ
ノール等のアルコール類が、保湿剤としてはプロ
ピレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレ
ングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビ
トール、乳酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカル
ボン酸ナトリウム等が、さらに防腐剤としてはパ
ラオキシ安息香酸エステル、安息香酸、安息香酸
ナトリウム、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、
フエノキシエタノール等がそれぞれ挙げられる。
〔発明の効果〕
本発明の外用剤組成物は、チユーベローズ由来
の酸性ヘテロ多糖類を配合することにより、保湿
効果に優れ、滑らかな使用感を有する。
〔実施例〕
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明す
る。
実施例 １
酸性ヘテロ多糖類の製造：
(a) カルスの誘導：
開花２〜７日前のチユーベローズ蕾を切り取
り、70％エタノール溶液で１分間滅菌し、さら
に１％次亜塩素酸ナトリウム溶液で10分間滅菌
した後、滅菌水で洗浄した。滅菌処理された外
植片を適当な大きさにきり、カルス誘導用培地
に接種した。
カルス誘導用培地には、基本培地として0.8
％の寒天を含むLinsmaier−Skoogの培地を用
いた。植物ホルモンとしてはオーキシンとして
10-5M、NAAとサイトカイニンとして10-6M
BAを添加した。炭素源としては３％サツカロ
ースを添加した。この培地を0.1N KOHでPH
5.7に調整したのち、オートクレーブにより120
℃、1.2気圧で15分間滅菌した。培養は電照下
25±１℃で行われた。30〜60日間の培養の後そ
れぞれの外植片からはカルスが誘導された。
(b) カルスの継代：
(a)において誘導されたそれぞれのカルスは、
誘導培地と同一の培地を用いて同一条件下で培
養され、30日おきに新しい培地に移植された。
(c) 振とう培養：
(b)において10代以上継代培養されたカルスに
ついて、上記カルス培養培地と同様の成分から
なる液体培地を用いて振とう培養を行つた。培
地の量は、200ml容の三角フラスコ当り80mlと
した。カルスは新鮮重で２ｇを接種し、25±１
℃、120rpmで30日間振とう培養した。
(d) 多糖類の採取方法：
(c)の培養液から遠心分離またはろ過により細
胞を除き、培養液をロータリーエバポレーター
を用いて濃縮した。この濃縮培養液に約３倍量
のエタノールを加え、５℃で24時間静置し沈澱
を得た。この沈澱を遠心分離により回収し、70
％エタノールで洗浄した後凍結乾燥により水分
を除去した。
上記の方法により、チユーベローズカルスから
1.91ｇ／／30日の細胞外多糖類が得られた。こ
の多糖類は次のような物性を有していた。
外観：白色〜灰白色粉末
糖含量（フエノール硫酸法及びカルバゾール法
による）：80％〔うちウロン酸（グルクロン酸）
含量25％〕
構成糖：アラビノース：ガラクトース：マンノー
ス：キシロース＝10：５：４：１
タンパク含量：２％
水分含量：５％
分子量：10000〜20000000
実施例 ２
化粧水：
下記に示す処方、製法により化粧水を調製し、
その保湿効果及び使用感を調べた。結果を第１〜
２表に示す。
（処方）
本発明品 比較品
（％） （％）
(1) 酸性ヘテロ多糖類
（実施例１） 0.5 −
(2) １，３−ブチレン
グリコール 2.5 2.5
(3) グリセリン（86％） 0.5 0.5
(4) ポリオキシエチレン硬
化ヒマシ油（40E.O.） 0.5 0.5
(5) 乳酸 0.05 0.05
(6) 乳酸ナトリウム 0.7 0.7
(7) エタノール 7.0 7.0
(8) メチルパラベン 0.1 0.1
(9) 香料 0.05 0.05
(10) 精製水 88.1 88.6
（製法）
精製水に(1)、(2)、(3)、(5)、(6)を加温溶解し、室
温に戻した後、エタノールに(4)、(8)、(9)を溶解し
たものをゆつくり加えて可溶化し、ろ過して化粧
水を得た。
（保湿効果測定法）
実施例２で得た化粧水と比較品とを用いて、保
湿効果試験を行つた。すなわち健常人の前腕部に
本発明および比較の化粧水を20μ／４cm2塗布
し、１時間後の角層水分量を測定した（Ｎ＝５、
測定装置：IBS社製SKICON−200）。
（使用テスト方法）
20〜35才の女性20名に対し、使用中の滑らかさ
とその持続性、べたつき、しつとり感の項目につ
いて、本発明品と比較品の使用テスト（コンペア
評価）を行つた。
（結果）
保湿効果
[Industrial Application Field] The present invention relates to a novel composition for external use, and more specifically to tuberose (Polianthes tuberosa).
Blended with acidic heteropolysaccharide obtained by tissue culture method from L. L., it is used for external use such as skin and hair cosmetics and external medicines that have excellent skin moisturizing, protective, and softening and smoothing effects. The present invention relates to a drug composition. [Prior art and its problems] Conventionally, external preparations, especially moisturizing agents for cosmetics,
Low molecular weight substances such as glycerin and sorbitol, NMF (natural moisturizing factor) ingredients such as sodium pyrrolidone carboxylate, etc. have been used, but in recent years,
Biopolymer substances such as mucopolysaccharides and various plant extracts are used as moisturizers. However, plant-derived polysaccharides are used as thickeners, gelling agents, etc., and if they are used in sufficient amounts to exert their moisturizing function, the system will thicken and feel uncomfortable on the skin. There were other drawbacks. On the other hand, the oily components of plants belonging to the genus Polyantes, especially tuberose, are used as fragrances, but there have been no reports on the water-soluble components obtained by tissue culture methods, and there are no reports on the water-soluble components obtained by tissue culture methods. There are no examples of it being applied to food, etc. [Means for Solving the Problems] Under such circumstances, the present inventors conducted intensive research and found that components derived from tuberose, among others,
The present invention was completed by discovering that an external preparation containing acidic heteropolysaccharide as a water-soluble component obtained by a tissue culture method has a highly moisturizing effect, a highly smoothing effect, and a smooth feeling of use. That is, the present invention provides an external preparation composition characterized by containing an acidic heteropolysaccharide obtained from a plant belonging to the genus Polianthes L. and comprising arabinose, mannose, galactose, xylose, and glucuronic acid. It is something that provides something. The tuberose-derived acidic heteropolysaccharide used in the present invention can be obtained, for example, by the following method. Tissue culture method: A part of a tuberose flower or the like is used as an explant, and a callus is induced using a basic medium containing plant hormones and sugar as a carbon source. This callus is further transferred to a liquid medium and cultured with shaking, and after removing cells from this culture by centrifugation or filtration, it is concentrated, ethanol is added to the concentrate to precipitate it, and the precipitate is freeze-dried. This gives an acidic heteropolysaccharide. In this method, parts of organs or tissues of tuberose such as flowers, stems, leaves, scales, roots, etc. are used as explants, and parts of flowers are particularly preferred. As the basic medium for callus induction, Murasige-Skoog medium, which is commonly used for plant tissue culture,
Linsmaier-Skoog's medium, Gamborg's medium,
White's medium, Tulecke's medium, Nitsch &
Nitsch's medium or the like can be used. It is necessary to add plant hormones to this basic medium, and plant hormones include 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), α-naphthaleneacetic acid (NAA), indoleacetic acid (IAA), Examples include auxins such as indolebutyric acid (IBA); cytokinins such as furfurylaminopurine (kinetin), benzyladenine (BA), and dimethylaminopurine (2iP). Among them, 2,
4-D alone or a combination of NAA and BA,
Or a combination of NAA and kinetin gives good results. The concentration of plant hormones required for callus induction ranges from 5 x 10 -4 M to 1 when using 2,4-D alone.
×10 -7 M; for NAA and BA or NAA and kinetin combinations, the concentration of NAA is 5 × 10 -4 M;
to 1×10 −7 M, and the concentration of BA or kinetin is 1×10 −4 M to 1×10 −7 M. In addition to the above-mentioned basic medium and plant hormones, sugar is added to the callus induction medium as a carbon source. Examples of the sugar include glucose, fructose, mannose, xylose, sutucarose, rhamnose, fucose, starch, etc., but sutucarose is usually used. Callus induction can be performed using either a solid medium or a liquid medium, but a solid medium is usually used. The induced callus can be subcultured for 10 or more generations while maintaining the same morphology in the above-mentioned callus induction medium. The medium for subculturing is usually Linsmaier-Skoog's medium or Murasige-Skoog's medium as a basic medium, and 1×10 -4 to 1×10 -7 M of 2,4-D or 1 as a plant hormone.
×10 -4 ~1×10 -7 M NAA and 1×10 -4 ~1×
As the 10 -7 M BA and the carbon source, glucose, fructose, mannose, xylose, sutucarose, rhamnose, fucose, starch, etc. are used, but sutucarose is particularly preferred, and the amount added is preferably 1 to 6%. In order to produce polysaccharides from callus, callus is cultured in a solid medium such as an agar medium, or in a liquid medium, and it is particularly preferable to culture in a liquid medium. The basic medium is the same as the callus induction medium,
For example, Murasige-Skoog's medium, Linsmaier-
Skoog's medium, Gamborg's medium, White's medium,
Tulecke's medium, Nitsch &Nitsch's medium, etc. may be used, but Murasige-Skoog's medium and Linsmier-Skoog's medium are particularly preferred. The type and concentration of plant hormones are related to polysaccharide productivity, such as 2,4-D, NAA,
Auxins such as IAA and IBA; kinetin,
Cytokinins such as BA and 2iP; Gibberellin A 3
Gibberellins such as (GA 3 ) are used. Among these, 2,4-D, NAA alone or
It is preferable to use a combination of NAA and BA or kinetin. Its concentration is 2,4-D or
When using NAA alone, 5×10 -4 M to 1×
10 -7 M, especially 5×10 -5 M to 5×10 -6 M;
When using a combination of NAA and BA or NAA and kinetin, the concentration of NAA is from 1 x 10 -4 M to 1 x 10 -7 M, especially from 1 x 10 -4 M to 5 x 10 -6 M,
BA or kinetin concentration ranges from 5 x 10 -5 M to 1
x10 -9 M, especially 1 x 10 -5 M to 1 x 10 -7 M are preferred. Carbon sources include glucose, fructose,
Mannose, xylose, satucalose, rhamnose, fucose, starch, etc. are used. Polysaccharide production is not very strongly influenced by the type of carbon source added, and sutucarose is usually used. There is not a very deep relationship between the concentration of carbon source and the amount of polysaccharide produced, but in general, it is between 1 and 6.
% is preferred. Cultivation method is not particularly limited, but usually at 20-30℃
It is preferable to carry out the culture at a temperature of 15 to 30 days, and shaking culture is preferable. In order to collect polysaccharides from the culture obtained in this way, for example, cells are removed from the culture by centrifugation or filtration, and then the culture solution is concentrated using a rotary evaporator or the like to obtain a concentrated solution. This is done by adding ethanol to the solution to precipitate it, and then freeze-drying the precipitate. The amount of acidic heteropolysaccharide blended into the external preparation composition of the present invention is 0.0001 to 10% by weight (hereinafter referred to as "%"), preferably 0.001 to 5%. If this amount is less than 0.0001%, the effect will not be sufficiently exhibited, which is not preferable. The external preparation composition of the present invention can be broadly classified into medicated skin preparations and cosmetics in terms of its usage form. Examples of medicated skin external preparations include various ointments containing medicinal ingredients. Ointments include those based on oily bases, oil/
It may be based on water or water/oil type emulsion base. There are no particular limitations on the medicinal ingredients, and for example, analgesic and anti-inflammatory agents, antipruritic agents, sterilizing disinfectants, astringents, emollients, hormonal agents, and the like can be used as appropriate. Cosmetics can be used in various forms, such as water/oil, oil/water type emulsified cosmetics, creams, cosmetic emulsions, lotions, oil-based cosmetics, lipsticks, foundations, hair tonics, hair conditioners, hair tonics, It can be used as a skin cosmetic such as a hair growth agent. In preparing these external preparations, suitable oils include, for example, hydrocarbons such as liquid paraffin, paraffin wax, ceresin, and squalane; waxes such as beetwax, spermaceti wax, and carnauba wax; olive oil, camellia oil, and jojoba. Examples include natural animal and vegetable oils such as oil and lanolin; silicone oils, fatty acids, higher alcohols, and ester oils obtained by reacting these. In addition, as surfactants, polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitol fatty acid ester, polyoxyethylene hydrogenated castor oil alkyl sulfate, polyoxyethylene alkyl sulfate ester , alkyl phosphate ester, polyoxyethylene alkyl phosphate ester, fatty acid alkali metal salt, sorbitan fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, etc. are used. Also,
The emulsified composition of the present invention can further contain various optional components, such as polymer compounds such as polyvinyl alcohol, carboxyvinyl polymer, carboxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, hydroxyethylcellulose, and methylcellulose as viscosity modifiers; gelatin, talacant gum Natural gums such as; alcohols such as ethanol and isopropanol; humectants such as propylene glycol, glycerin, 1,3-butylene glycol, dipropylene glycol, sorbitol, lactic acid, sodium lactate, sodium pyrrolidone carboxylate, etc.; Preservatives include paraoxybenzoic acid ester, benzoic acid, sodium benzoate, sorbic acid, potassium sorbate,
Examples include phenoxyethanol and the like. [Effects of the Invention] The external preparation composition of the present invention has an excellent moisturizing effect and a smooth feel when used by incorporating the acidic heteropolysaccharide derived from tuberose. [Example] Next, the present invention will be explained in more detail with reference to Examples. Example 1 Production of acidic heteropolysaccharide: (a) Induction of callus: Tuberose buds 2 to 7 days before flowering were cut, sterilized with 70% ethanol solution for 1 minute, and further sterilized with 1% sodium hypochlorite solution for 10 minutes. After sterilization for a minute, it was washed with sterile water. The sterilized explants were cut into appropriate sizes and inoculated into a callus induction medium. For callus induction medium, 0.8
Linsmaier-Skoog's medium containing % agar was used. As a plant hormone, auxin
10 -5 M, 10 -6 M as NAA and cytokinin
BA was added. 3% sutucarose was added as a carbon source. PH this medium with 0.1N KOH
After adjusting to 5.7, autoclave to 120
Sterilized at 1.2 atm for 15 minutes. Culture under electric light
It was carried out at 25±1°C. Callus was induced from each explant after 30 to 60 days of culture. (b) Subculture of callus: Each callus induced in (a) is
They were cultured under the same conditions using the same medium as the induction medium and transferred to fresh medium every 30 days. (c) Shaking culture: The callus subcultured for 10 or more generations in (b) was cultured with shaking using a liquid medium containing the same components as the callus culture medium described above. The amount of culture medium was 80 ml per 200 ml Erlenmeyer flask. Callus was inoculated with 2g fresh weight, 25±1
The culture was carried out at 120 rpm for 30 days at ℃. (d) Method for collecting polysaccharides: Cells were removed from the culture solution in (c) by centrifugation or filtration, and the culture solution was concentrated using a rotary evaporator. Approximately three times the volume of ethanol was added to this concentrated culture solution, and the mixture was allowed to stand at 5°C for 24 hours to obtain a precipitate. This precipitate was collected by centrifugation and
After washing with % ethanol, water was removed by freeze-drying. From tuberose callus by the above method.
1.91 g/30 days of extracellular polysaccharide was obtained. This polysaccharide had the following physical properties. Appearance: White to off-white powder Sugar content (by phenol sulfuric acid method and carbazole method): 80% [of which uronic acid (glucuronic acid)]
Content 25%] Constituent sugar: arabinose: galactose: mannose: xylose = 10:5:4:1 Protein content: 2% Water content: 5% Molecular weight: 10000-20000000 Example 2 Lotion: According to the formulation and manufacturing method shown below Prepare lotion,
Its moisturizing effect and feeling of use were investigated. Results first
It is shown in Table 2. (Formulation) Inventive product Comparative product (%) (%) (1) Acidic heteropolysaccharide (Example 1) 0.5 - (2) 1,3-butylene glycol 2.5 2.5 (3) Glycerin (86%) 0.5 0.5 ( 4) Polyoxyethylene hydrogenated castor oil (40E.O.) 0.5 0.5 (5) Lactic acid 0.05 0.05 (6) Sodium lactate 0.7 0.7 (7) Ethanol 7.0 7.0 (8) Methylparaben 0.1 0.1 (9) Fragrance 0.05 0.05 (10 ) Purified water 88.1 88.6 (Production method) Dissolve (1), (2), (3), (5), and (6) in purified water by heating, return to room temperature, and then dissolve (4) and (8) in ethanol. ) and (9) were slowly added to solubilize the mixture and filtered to obtain a lotion. (Moisturizing Effect Measuring Method) A moisturizing effect test was conducted using the lotion obtained in Example 2 and a comparative product. That is, 20 μ/4 cm 2 of the present invention and comparative lotions were applied to the forearms of healthy subjects, and the moisture content of the stratum corneum was measured 1 hour later (N = 5,
Measuring device: SKICON-200 manufactured by IBS. (Usage test method) We conducted a use test (comparison evaluation) of the inventive product and a comparative product on 20 women between the ages of 20 and 35 regarding smoothness and durability during use, stickiness, and moisturizing feeling. Ivy. (Result) Moisturizing effect
【表】
本発明品塗布部位の水分量は、比較品塗布部
位より明らかに増加しており、チユーベローズ
由来多糖類配合化粧水の高い保湿効果が確認さ
れた。
使用テスト[Table] The moisture content of the area where the product of the present invention was applied was clearly higher than that of the area where the comparison product was applied, confirming the high moisturizing effect of the tuberose-derived polysaccharide-containing lotion. Usage test
【表】
チユーベローズ由来多糖類を配合した本発明
の化粧水は、使用中の滑らかさとその持続性が
顕著であり、しつとり感が強いわりにはべたつ
きが少ないという特徴的な使用感があつた。
実施例 ３
乳液：
（処方）
（％）
(1) 流動パラフイン 4.0
(2) スクワラン 4.0
(3) セタノール 0.5
(4) ステアリン酸 1.5
(5) モノオレイン酸ソルビタン 1.0
(6) モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタ
ン（20E.O.） 1.0
(7) モノステアリン酸グリセリン 0.5
(8) エチルパラベン 0.2
(9) グリセリン 3.0
(10) １，３−ブチレングリコール 5.0
(11) 酸性ヘテロ多糖類（実施例１） 0.3
(12) 香料 0.05
(13) 精製水 78.95
（製法）
(1)〜(8)、(12)を加熱溶解し、70℃に保つ（油相）。
(9)〜(11)を精製水に加熱溶解し、徐々に油相に加え
て乳化し、徐冷して乳液を得た。
実施例 ４
クリール：
（処方）
（％）
(1) ワセリン 8.0
(2) ラノリン 2.0
(3) スクワラン 20.0
(4) セタノール 5.0
(5) モノステアリン酸グリセリン 2.0
(6) ポリオキシエチレンモノラウリン酸ソルビタ
ン（20E.O.） 2.0
(7) エチルパラベン 0.2
(8) 酸性ヘテロ多糖類（実施例１） 0.5
(9) グリセリン（86％） 5.0
(10) １，３−ブチレングリコール 5.0
(11) 香料 0.1
(12) 精製水 50.2
（製法）
(1)〜(7)と(11)を加熱溶解し、70℃に保つ（油相）。
(8)〜(10)を精製水に加熱溶解したものに、撹拌しな
がら油相を加える。ホモミキサー処理した後、急
冷してクリームを得た。
実施例 ５
パツク：
（処方）
（％）
(1) ポリビニルアルコール 18.0
(2) ポリエチレングリコール 2.0
(3) １，３−ブチレングリコール 5.0
(4) 酸性ヘテロ多糖類（実施例１） 0.5
(5) エタノール 8.0
(6) メチルパラベン 0.1
(7) 香料 0.05
(8) 精製水 66.35
（製法）
精製水に(2)(3)(4)、(6)を加え、撹拌溶解し、次に
ポリビニルアルコールを加え、加熱撹拌する。こ
こに香料を溶解したエタノールを加えて、溶解し
てパツクを得た。
実施例 ６
エツセンス：
（％）
(1) 酸性ヘテロ多糖類（実施例１） 1.0
(2) １，３−ブチレングリコール 20.0
(3) グリセリン（86％） 15.0
(4) ポリエチレングリコール 5.0
(5) ポリオキシエチレンヘキサデシルエーテル
（2.0E.O.） 0.1
(6) クエン酸 0.05
(7) クエン酸ナトリウム 0.5
(8) メチルパラベン 0.2
(9) 香料 0.1
(10) 精製水 58.05
(1)〜(8)を精製水に加熱溶解したものに、(9)を加
えて可溶化し、エツセンスを得た。[Table] The lotion of the present invention containing tuberose-derived polysaccharide has a remarkable smoothness and long-lasting effect during use, and has a characteristic feeling of being moisturized but not sticky. Ta. Example 3 Emulsion: (Formulation) (%) (1) Liquid paraffin 4.0 (2) Squalane 4.0 (3) Setanol 0.5 (4) Stearic acid 1.5 (5) Sorbitan monooleate 1.0 (6) Polyoxyethylene monooleate Sorbitan (20E.O.) 1.0 (7) Glyceryl monostearate 0.5 (8) Ethylparaben 0.2 (9) Glycerin 3.0 (10) 1,3-butylene glycol 5.0 (11) Acidic heteropolysaccharide (Example 1) 0.3 (12) Fragrance 0.05 (13) Purified water 78.95 (Production method) Dissolve (1) to (8) and (12) by heating and keep at 70°C (oil phase).
(9) to (11) were heated and dissolved in purified water, gradually added to the oil phase to emulsify, and slowly cooled to obtain a milky lotion. Example 4 Creel: (Formulation) (%) (1) Vaseline 8.0 (2) Lanolin 2.0 (3) Squalane 20.0 (4) Setanol 5.0 (5) Glyceryl monostearate 2.0 (6) Polyoxyethylene monolaurate sorbitan (20E .O.) 2.0 (7) Ethylparaben 0.2 (8) Acidic heteropolysaccharide (Example 1) 0.5 (9) Glycerin (86%) 5.0 (10) 1,3-butylene glycol 5.0 (11) Fragrance 0.1 (12 ) Purified water 50.2 (Production method) Dissolve (1) to (7) and (11) by heating and keep at 70℃ (oil phase).
Add the oil phase to a heated solution of (8) to (10) in purified water while stirring. After treatment with a homomixer, the mixture was rapidly cooled to obtain cream. Example 5 Pack: (Formulation) (%) (1) Polyvinyl alcohol 18.0 (2) Polyethylene glycol 2.0 (3) 1,3-butylene glycol 5.0 (4) Acidic heteropolysaccharide (Example 1) 0.5 (5) Ethanol 8.0 (6) Methylparaben 0.1 (7) Fragrance 0.05 (8) Purified water 66.35 (Production method) Add (2), (3), (4), and (6) to purified water, stir and dissolve, then add polyvinyl alcohol, Heat and stir. Ethanol in which the fragrance was dissolved was added and dissolved to obtain a pack. Example 6 Essence: (%) (1) Acidic heteropolysaccharide (Example 1) 1.0 (2) 1,3-butylene glycol 20.0 (3) Glycerin (86%) 15.0 (4) Polyethylene glycol 5.0 (5) Poly Oxyethylene hexadecyl ether (2.0EO) 0.1 (6) Citric acid 0.05 (7) Sodium citrate 0.5 (8) Methylparaben 0.2 (9) Fragrance 0.1 (10) Purified water 58.05 Add (1) to (8) to purified water (9) was added to the heated solution to solubilize it to obtain essence.
【特許請求の範囲】[Claims]
１ 一般式（）
（式中、R1はアルキル基、フエニル基、置換フ
エニル基、ベンジル基、フエネチル基、スチリル
基、ピリジル基、キノリル基、チエニル基を示
し、R2は水素原子、シアノ基、アミド基を示し、
R3、R4は水素原子、アルキル基、ホルミル基、
プロピオニル基、ベンゾイル基、アミノエチル
基、フエニル基である。またR3、R4は結合して
1 General formula () (In the formula, R 1 represents an alkyl group, phenyl group, substituted phenyl group, benzyl group, phenethyl group, styryl group, pyridyl group, quinolyl group, or thienyl group, and R 2 represents a hydrogen atom, cyano group, or amide group. ,
R 3 and R 4 are hydrogen atoms, alkyl groups, formyl groups,
They are propionyl group, benzoyl group, aminoethyl group, and phenyl group. Also, R 3 and R 4 are combined