JPH064024B2 - クロストリジウム・ブチリクムの芽胞生産方法 - Google Patents
クロストリジウム・ブチリクムの芽胞生産方法Info
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- JPH064024B2 JPH064024B2 JP19737985A JP19737985A JPH064024B2 JP H064024 B2 JPH064024 B2 JP H064024B2 JP 19737985 A JP19737985 A JP 19737985A JP 19737985 A JP19737985 A JP 19737985A JP H064024 B2 JPH064024 B2 JP H064024B2
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- Japan
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- clostridium butyricum
- spore
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Description
【発明の詳細な説明】 a. 産業上の利用分野 本発明はクロストリジウム・ブチリクムの大量培養にお
ける芽胞生産方法に関する。
ける芽胞生産方法に関する。
b. 従来の技術 クロストリジウム・ブチリクム（以下Cl.hut.と略す）
群は芽胞形成菌である。従って本菌群の芽胞形成を効率
良く行わせるには、栄養細胞の生育を十分に行なわせる
ことが必要である。しかし十分に栄養細胞を生育させて
も、それが、芽胞形成に効率良く移るとは限らない。
群は芽胞形成菌である。従って本菌群の芽胞形成を効率
良く行わせるには、栄養細胞の生育を十分に行なわせる
ことが必要である。しかし十分に栄養細胞を生育させて
も、それが、芽胞形成に効率良く移るとは限らない。
従来の方法では、炭酸カルシウムを培地中に大量に添加
し、それによって急激に低下するpHを抑制していたが、
芽胞形成pH域を短時間で通過するため芽胞形成の効率が
悪い。
し、それによって急激に低下するpHを抑制していたが、
芽胞形成pH域を短時間で通過するため芽胞形成の効率が
悪い。
c. 発明が解決しようとする問題点 本発明者らは、芽胞形成の効率を高めるために鋭意研究
をし、その結果、芽胞形成させるためには、ある特定の
栄養源があること、pHを特定の範囲に保つことが必要で
あることを見出した。
をし、その結果、芽胞形成させるためには、ある特定の
栄養源があること、pHを特定の範囲に保つことが必要で
あることを見出した。
本発明で限定するpH域において、ある特定時間培養する
ことで芽胞生成効率を上げることができる。
ことで芽胞生成効率を上げることができる。
d. 問題点を解決するための手段 本発明は、炭素源としてスターチ類、窒素源として味
液，肉エキス，ペプトン等を用いて培地とし、これにC
l．but．を接種して、これを培養するにあたり、アルカ
リを添加して芽胞形成期に培地をpH６〜5.5に維持する
ことを特徴とするクロストリジウム・ブチリクムの芽胞
生産方法を提供するものである。
液，肉エキス，ペプトン等を用いて培地とし、これにC
l．but．を接種して、これを培養するにあたり、アルカ
リを添加して芽胞形成期に培地をpH６〜5.5に維持する
ことを特徴とするクロストリジウム・ブチリクムの芽胞
生産方法を提供するものである。
本発明の方法は、アルカリにて人為的にpHをコントロー
ルすることにより、栄養細胞の生育に適切なpH域を維持
し、栄養細胞数を増大させ、pHを芽胞形成域まで徐々に
低下させ、芽胞形成域にてこのpH域を長時間維持させる
ことにより効率の良い芽胞生産を行うものである。
ルすることにより、栄養細胞の生育に適切なpH域を維持
し、栄養細胞数を増大させ、pHを芽胞形成域まで徐々に
低下させ、芽胞形成域にてこのpH域を長時間維持させる
ことにより効率の良い芽胞生産を行うものである。
本発明はCl.but.の生態の特徴をとらえ培養のpHをコン
トロールすることで効率的に芽胞を生産することができ
る。
トロールすることで効率的に芽胞を生産することができ
る。
本発明の芽胞生産方法は、例えば、第１図に示されるプ
ロセスで行なわれる。
ロセスで行なわれる。
例えば、３０の培養槽炭素源としてにコーンスター
チ，粉アメ，可溶性デンプン，水アメなどのスターチ類
（加水分解物も含む）の少くとも１種と、窒素源として
味液（大豆の加水分解物），肉エキス，ペプトン等のう
ちの少くとも１種を投入し、例えば121℃で20分間滅菌
し、80〜90℃に冷却する。
チ，粉アメ，可溶性デンプン，水アメなどのスターチ類
（加水分解物も含む）の少くとも１種と、窒素源として
味液（大豆の加水分解物），肉エキス，ペプトン等のう
ちの少くとも１種を投入し、例えば121℃で20分間滅菌
し、80〜90℃に冷却する。
この培地に予め培養しあったCl.but.の芽胞を含む培養
液を加えると、培地はpH5.5位に低下する。次いで、37
℃に冷却したのち、pH7.0に調整する。このとき、pHの
調整には、炭酸カルシウムを一切使用せず、10％のNaOH
又はKOHを用いる。
液を加えると、培地はpH5.5位に低下する。次いで、37
℃に冷却したのち、pH7.0に調整する。このとき、pHの
調整には、炭酸カルシウムを一切使用せず、10％のNaOH
又はKOHを用いる。
pH7.0で２〜３時間放置すると、芽胞は栄養畑胞となっ
て増殖しはじめ、pHは徐々に低下する。この状態を３〜
５時間維持し、その間、10％NaOHによって、pHを７に調
整する。
て増殖しはじめ、pHは徐々に低下する。この状態を３〜
５時間維持し、その間、10％NaOHによって、pHを７に調
整する。
次いで、徐々にpHを低下させ、増殖の進行が最大になっ
たとき、pHを6.0に役１時間保持し、増殖を十分に進行
させた後に、pHを6.0〜5.5に調整し、３〜６時間保持す
る。かくして、効率良く栄養細胞を得る。
たとき、pHを6.0に役１時間保持し、増殖を十分に進行
させた後に、pHを6.0〜5.5に調整し、３〜６時間保持す
る。かくして、効率良く栄養細胞を得る。
e. 実施例，比較例 基礎培地として、コーンスターチ，味液をそれぞれ４％
とし、１０％NaOHにてpHコントロールをしながら培養を
行った場合を、基礎培地にCaCO3を添加した場合におい
て、３種のCl.but.について形成される芽胞数を測定し
た。
とし、１０％NaOHにてpHコントロールをしながら培養を
行った場合を、基礎培地にCaCO3を添加した場合におい
て、３種のCl.but.について形成される芽胞数を測定し
た。
下記試験において、操作液量は20、芽胞の測定はトー
マの血球計算板を用い検鏡にて行った。
マの血球計算板を用い検鏡にて行った。
実施例1. 上記基礎培地を用い、Cl.but.588株を用いて、培養液の
pHをpH７，pH6.5，pH6.0，5.7，pH5.5の各pHに一定時間
保たせながら低下させた。このときのpHコントロールの
状況，pH保持時間を第２図に示す。芽胞数は8.2Ｘ108ce
lls／mlで完全芽胞であった。
pHをpH７，pH6.5，pH6.0，5.7，pH5.5の各pHに一定時間
保たせながら低下させた。このときのpHコントロールの
状況，pH保持時間を第２図に示す。芽胞数は8.2Ｘ108ce
lls／mlで完全芽胞であった。
実施例2. 上記基礎培地を用い、Cl.but.703株を用いて、培養液の
pHをpH７，pH6.5，pH6.0，pH5.7，pH5.5とし、各pHを一
定時間保たせながらpHを低下させた。このときのpHコン
トロールの状況は第２図と全く同様とした。芽胞数は7.
0×108cells／mlで完全芽胞であった。
pHをpH７，pH6.5，pH6.0，pH5.7，pH5.5とし、各pHを一
定時間保たせながらpHを低下させた。このときのpHコン
トロールの状況は第２図と全く同様とした。芽胞数は7.
0×108cells／mlで完全芽胞であった。
実施例3. 上記基礎培地を用い、Cl.but.ATCC19395株を用いて、実
施例２と全く同様にpHをコントロールした。pHコントロ
ール状況，pH保持時間は第２図に記載のとおりであり、
芽胞数6.8×108cells／mlで完全芽胞であった。
施例２と全く同様にpHをコントロールした。pHコントロ
ール状況，pH保持時間は第２図に記載のとおりであり、
芽胞数6.8×108cells／mlで完全芽胞であった。
比較例1. 上記基礎培地を用い、Cl.but.588株を使用し、培養液を
まずpH７で一定に保ち、次いでpH5.5に急激に低下させ
た。この場合の培養時間に対するpHコントロールを第４
図に記載した。培養終了時間の芽胞数は5.0×107cells
／mlで完全芽胞であった。
まずpH７で一定に保ち、次いでpH5.5に急激に低下させ
た。この場合の培養時間に対するpHコントロールを第４
図に記載した。培養終了時間の芽胞数は5.0×107cells
／mlで完全芽胞であった。
比較例2. 上記基礎培地を用い、同じくCl.but.588株を用い、培養
液のpHをpH７，pH6.5，pH6.0の各pHに一定時間保たせな
がら低下させた。このときのpHコントロールの状況，pH
保持時間を第３図に示す。芽胞数は1.0×108cells／ml
であった。
液のpHをpH７，pH6.5，pH6.0の各pHに一定時間保たせな
がら低下させた。このときのpHコントロールの状況，pH
保持時間を第３図に示す。芽胞数は1.0×108cells／ml
であった。
比較例3. Cl.but.588株を使用し、上記基礎培地にCaCO3を1.5％添
加し、全くpHをコントロールしなかった。このときのpH
の経時変化は第６図に記載したとおりであり、培養終了
時の芽胞数は3.0×108cells／mlであった。
加し、全くpHをコントロールしなかった。このときのpH
の経時変化は第６図に記載したとおりであり、培養終了
時の芽胞数は3.0×108cells／mlであった。
比較例4. Cl.but.588株を使用し、基礎培地のみで全くpHを修正し
なかった。pHの経時変化は第７図のとおりであり、培養
終了時の芽胞数は1.2×107cells／mlであったがいわゆ
る内生芽胞の初期でそれ以上進まなかった。
なかった。pHの経時変化は第７図のとおりであり、培養
終了時の芽胞数は1.2×107cells／mlであったがいわゆ
る内生芽胞の初期でそれ以上進まなかった。
比較例5. Cl.but.588株を使用し、上記基礎培地を用い、培養液の
pHをpH７で長時間一定に保ち、栄養細胞の増殖を行い、
その後pH修正を行わなかった。このときのpHのコントロ
ールの状況は第８図に記載のとおりであり、培養終了時
の芽胞数は8.8×107cells／mlで内生芽胞で完全芽胞に
は移らない。
pHをpH７で長時間一定に保ち、栄養細胞の増殖を行い、
その後pH修正を行わなかった。このときのpHのコントロ
ールの状況は第８図に記載のとおりであり、培養終了時
の芽胞数は8.8×107cells／mlで内生芽胞で完全芽胞に
は移らない。
これらの実施例と比較例の結果より、pH７において栄養
細胞を増殖させても、pHの調整を行なわず、pHを急激に
低下させると、栄養細胞は溶菌し、内生芽胞のままとな
る（第８図）。同様に第４図のようにpH７よりpH5.5にp
Hを急激に低下させても完全芽胞はできない。また第５
図に示すように、pHを6.0まで修正してもあまり良好な
芽胞形成が行われない。しかし第２図に示すようにpH6.
0〜pH5.5の域で長時間培養することにより、完全芽胞数
の増加がみられる。第６図CaCO3を添加した実験では、
やや良好な芽胞数を得ているが、pH6.0〜pH5.5の域を長
時間保持している。
細胞を増殖させても、pHの調整を行なわず、pHを急激に
低下させると、栄養細胞は溶菌し、内生芽胞のままとな
る（第８図）。同様に第４図のようにpH７よりpH5.5にp
Hを急激に低下させても完全芽胞はできない。また第５
図に示すように、pHを6.0まで修正してもあまり良好な
芽胞形成が行われない。しかし第２図に示すようにpH6.
0〜pH5.5の域で長時間培養することにより、完全芽胞数
の増加がみられる。第６図CaCO3を添加した実験では、
やや良好な芽胞数を得ているが、pH6.0〜pH5.5の域を長
時間保持している。
従ってCl.but.の芽胞形成は第２図に示すように培養初
期よりpHが急激に低下しない様にアルカリ物質にてpH７
〜pH6.5の領域を栄養細胞が増殖するようにコントロー
ルし、特にpH6.0〜pH5.5の領域を徐々に低下させること
により芽胞形成を行わせること必要である。このように
液体のアルカリを添加することにより、人為的にpHをコ
ントロールし、芽胞数を増大させ、単位容量当り濃度の
高い芽胞を分離することが可能となった。
期よりpHが急激に低下しない様にアルカリ物質にてpH７
〜pH6.5の領域を栄養細胞が増殖するようにコントロー
ルし、特にpH6.0〜pH5.5の領域を徐々に低下させること
により芽胞形成を行わせること必要である。このように
液体のアルカリを添加することにより、人為的にpHをコ
ントロールし、芽胞数を増大させ、単位容量当り濃度の
高い芽胞を分離することが可能となった。
ｆ．発明の効果 本発明によれば、培地中の炭酸カルシウムを除くことが
でき、後の工程が簡略化される。また培養後の固型分と
して多量を占めた炭酸カルシウムが除かれたため非常に
力価の高いCl.but.の培養菌体を得ることができる。
でき、後の工程が簡略化される。また培養後の固型分と
して多量を占めた炭酸カルシウムが除かれたため非常に
力価の高いCl.but.の培養菌体を得ることができる。
第１図は本発明の芽胞生産方法のプロセス図、第２図、
第３図は、実施例１〜３における培養時間に対するpHコ
ントロール状態を示す図表、第４図〜第８図は比較例１
〜５における培養時間に対するpHコントロール状態を示
す図である。
第３図は、実施例１〜３における培養時間に対するpHコ
ントロール状態を示す図表、第４図〜第８図は比較例１
〜５における培養時間に対するpHコントロール状態を示
す図である。
Claims (2)
- 【請求項１】炭素源としてスターチ類、窒素源として味
液，肉エキス，ペプトン，イーストエキス等を用いて培
地とし、これにクロストリジウム・ブチリクムを接種し
て、これを培養するにあたり、アルカリを添加して芽胞
形成期に培地をpH６〜5.5に維持することを特徴とする
クロストリジウム・ブチリクムの芽胞生産方法。 - 【請求項２】上記の培地をpH6.0〜5.5に３〜40時間保持
することを特徴とする特許請求の範囲(1)に記載のクロ
ストリジウム・ブチリクムの芽胞生産方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19737985A JPH064024B2 (ja) | 1985-09-06 | 1985-09-06 | クロストリジウム・ブチリクムの芽胞生産方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19737985A JPH064024B2 (ja) | 1985-09-06 | 1985-09-06 | クロストリジウム・ブチリクムの芽胞生産方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6258990A JPS6258990A (ja) | 1987-03-14 |
| JPH064024B2 true JPH064024B2 (ja) | 1994-01-19 |
Family
ID=16373530
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19737985A Expired - Lifetime JPH064024B2 (ja) | 1985-09-06 | 1985-09-06 | クロストリジウム・ブチリクムの芽胞生産方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH064024B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5266315A (en) * | 1990-05-07 | 1993-11-30 | Kabushiki Kaisha Miyarisan Seibutsu Igaku Kenkyusho | Composite for Clostridium difficile diarrhea and pseudomembranous colitis |
-
1985
- 1985-09-06 JP JP19737985A patent/JPH064024B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6258990A (ja) | 1987-03-14 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
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