JPH07100716B2 - ペプチド - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新しいペプチド、詳し
くは抗菌活性を示す新規なペプチドに関する。

【０００２】

【従来の技術】正常蚕に非経口的に不活性化大腸菌等の
異物を投与することにより蚕体液中にある種の抗菌活性
物質が誘導されることが知られている〔蚕における生体
防禦機構１・死菌ワクチン接種による抗菌物質の誘導、
肥山良之他、日本動物学会第４９回大会、一般講演集、
３７９（１９７８）；同III ・蚕体液中の抗菌活性物質
の精製とその生物学的性状、大森和則他同、３８０（１
９７８）参照〕。

【０００３】本発明者らは、上記蚕由来の抗菌活性物質
について更に研究を重ねた結果、該物質の単離に成功
し、これがアミノ酸３５個からなるペプチドであること
を確認し、先に該ペプチドに係る発明を完成した〔特開
昭６０−７５４９８号公報〕。

【０００４】

【発明が解決しようとする問題点】本発明者は、引き続
く研究において、上記ペプチドの化学合成過程で得られ
るある種の新規なオリゴペプチドが、抗菌活性を有する
ことを見い出した。本発明は、この知見に基づいて完成
されたものである。

【０００５】

【問題点を解決するための手段】本発明によれば式 Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ （１） で表わされるアミノ酸配列を有するペプチドが提供され
る。

【０００６】本明細書において、アミノ酸、ペプチド、
保護基、活性基、その他に関して略号で表示する場合は
ＩＵＰＡＣ、ＩＵＢの規定或いは当該分野における慣用
記号に従うものとし、その例を次に挙げる。またアミノ
酸等に関して光学異性体がありうる場合は、特に明記し
なければＬ体を示すものとする。

【０００７】Ｓｅｒ；セリン、Ａｌａ；アラニン、Ｌｙ
ｓ；リジン、Ｉｌｅ；イソロイシン、Ｚ；ベンジルオキ
シカルボニル基、ＣｌＺ；２−クロロベンジルオキシカ
ルボニル基、Ｂｏｃ；第３級ブトキシカルボニル基、Ｏ
Ｎｐ；ｐ−ニトロフエニルオキシ基、Ｂｚｌ；ベンジル
基、ＯＢｚｌ；ベンジルオキシ基、ＯＳｕ；Ｎ−ヒドロ
キシスクシンイミド基、ＯＰａｃ；ベンゾイルメトキシ
（フエナシル）基、ＯＰｃｐ；ペンタクロロフエノキシ
基。

【０００８】本発明の上記式（１）で表わされるペプチ
ドは、グラム陽性菌及びグラム陰性菌に対して抗菌活性
を有し、ヒト及び動物用の抗菌剤として有用である。

【０００９】上記式（１）で表わされるペプチドは、入
手容易な市販のアミノ酸を利用して、簡単な操作で容易
に合成することができる。

【００１０】以下、本発明ペプチドの化学合成法につき
詳述する。

【００１１】本発明ペプチドは、通常のペプチド合成
法、具体的には「ザ ペプチド（Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ）」第１巻（１９６６年）〔Ｓｃｈｒｏｄｅｒ ａ
ｎｄＬｕｈｋｅ著、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ, ＵＳＡ〕或いは「ペプチド合成」〔泉
屋ら著、丸善株式会社（１９７５年）〕に記載されるご
とき方法に従い、例えばアジド法、クロライド法、酸無
水物法、混酸無水物法、ジシロヘキシルカルボジイミド
（ＤＣＣ）法、活性エステル法、（ｐ−ニトロフエニル
エステル法、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル
法、シアノメチルエステル法等）、ウツドワード試薬Ｋ
を用いる方法、カルボジイミダゾール法、酸化還元法、
ＤＣＣ／アデイテイブ（Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボル
ネン−２，３−ジカルボキシイミド；ＨＯＮＢ、１−ヒ
ドロキシベンゾトリアゾール；ＨＯＢｔ、Ｎ−ヒドロキ
シコハク酸イミド；ＨＯＳｕ）法等により製造できる。
上記方法においては、固相合成法及び液相合成法のいず
れをも適用できる。

【００１２】通常本発明のペプチドは、上記した一般の
ポリペプチドの合成法に従い、例えば末端アミノ酸に順
次１個ずつアミノ酸を縮合させる所謂ステップワイズ法
により、又は数個のフラグメントに分けてカップリング
させていく方法により製造される。

【００１３】上記いずれの方法においても反応に関与し
ない官能基は通常保護され、又側鎖官能基を有するアミ
ノ酸もその側鎖官能基を保護しておくのが好ましく、こ
れらは通常の保護基により保護され、反応終了後該保護
基は必要に応じ脱離される。また反応に関与する官能基
は、通常活性化される。之等各反応方法は、公知であ
り、それらに用いられる試薬等も公知のものから適宜選
択し得る。

【００１４】アミノ基の保護基としては、例えばＺ、Ｃ
ｌＺ、Ｂｏｃ、ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル、イ
ソボルニルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオ
キシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、トリ
フルオロアセチル、フタリル、ホルミル、ｏ−ニトロフ
エニルスルフエニル、ジフエニルホスフイノチオイル基
等が挙げられる。

【００１５】カルボキシル基の保護基としては、例えば
アルキルエステル（例メチル、エチル、プロピル、ブチ
ル、ｔｅｒｔ−ブチルなどのアルキルエステル）、Ｂｚ
ｌエステル、ベンゾイルメチルエステル、ｐ−ニトロベ
ンジルエステル、ｐ−メトキシベンジルエステル、ｐ−
クロルベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル、カ
ルボベンゾキシヒドラジド、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカ
ルボニルヒドラジド、トリチルヒドラジド等を形成し得
る基を例示できる。

【００１６】Ｓｅｒの水酸基は、例えばエステル化また
はエーテル化によって保護することができるが必ずしも
保護する必要はない。このエステル化に適する基として
は、例えばアセチル基等の低級アルカノイル、ベンゾイ
ル等のアロイル、ベンゾイルオキシカルボニル、エチル
オキシカルボニル等の炭酸から誘導される基等が挙げら
れる。またエーテル化に適する基としては、例えばベン
ジル、テトラヒドロピラニル、ｔｅｒｔ−ブチル基等を
例示できる。

【００１７】Ｌｙｓのアミノ基の保護基としては、例え
ばＺ、ＣｌＺ、Ｂｏｃ、ｐ−トルエンスルホニル基等が
挙げられる。

【００１８】カルボキシル基の活性化されたものとして
は、例えば対応する酸クロライド、酸無水物又は混合酸
無水物、アジド、活性エステル（ペンタクロロフエノー
ル、ｐ−ニトロフエノール、Ｎ−ヒドロキシサクシンイ
ミド、Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロ
キシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド
等とのエステル）等が挙げられる。

【００１９】上記方法において反応性アミノ基と反応性
カルボキシル基との縮合反応（ペプチド結合形成反応）
は、溶媒の存在下に行ない得る。溶媒としては、ペプチ
ド結合形成に使用し得ることが知られている各種のも
の、例えば無水または含水のジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ピリジ
ン、クロロホルム、ジオキサン、ジクロルメタン、テト
ラヒドロフラン（ＴＨＦ）、酢酸エチル、Ｎ−メチルピ
ロリドン、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）
或いはこれらの混合溶媒等を用い得る。両原料化合物の
使用割合としては、特に限定はないが、通常一方に対し
て他方を等モル量〜５倍モル量、好ましくは等モル量〜
１．５倍モル量とするのがよい。反応温度はペプチド結
合形成反応に使用される通常の範囲、一般には約−４０
℃〜約６０℃、好ましくは約−２０℃〜約４０℃の範囲
から適宜選択される。反応時間は一般に数分〜３０時間
程度である。

【００２０】尚、混合酸無水物法を採用する場合は、適
当な溶媒中、塩基性化合物の存在下、アルキルハロカル
ボン酸、例えばクロロ蟻酸メチル、ブロモ蟻酸メチル、
クロロ蟻酸エチル、ブロモ蟻酸エチル、クロロ蟻酸イソ
ブチル等を用いて行なわれる。塩基性化合物としては、
例えばトリエチルアミン、トリメチルアミン、ジイソプ
ロピルエチルアミン、ピリジン、ジメチルアニリン、Ｎ
−メチルモルホリル、１，５−ジアザビシクロ〔４，
３，０〕ノネン−５（ＤＢＮ）、１，５−ジアザビシク
ロ〔５，４，０〕ウンデセン−５（ＤＢＵ）、１，４−
ジアザビシクロ〔２，２，２〕オクタン（ＤＡＢＣＯ）
等の有機塩基や炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水
素カリウム、炭酸水素ナトリウム等の無機塩基を使用で
きる。また溶媒としては、混合酸無水物法に慣用の各種
溶媒、具体的には塩化メチレン、クロロホルム、ジクロ
ロエタン等のハロゲン化炭化水素類、ベンゼン、トルエ
ン、キシレン等の芳香族炭化水素類、ジエチルエーテ
ル、ＴＨＦ、ジメトキシエタン等のエーテル類、酢酸メ
チル、酢酸エチル等のエステル類、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、
ＨＭＰＡ等の非プロトン性極性溶媒などを使用できる。
反応は通常−２０〜１００℃、好ましくは−２０〜５０
℃において行なわれ、反応時間は一般的に５分〜１０時
間、好ましくは５分〜２時間である。

【００２１】またアジド化法を採用する場合、まず活性
化させたカルボキシル基、例えばメチルアルコール、エ
チルアルコール、ベンジルアルコール等のアルコールで
活性化されたカルボキシル基にヒドラジン水和物を適当
な溶媒中にて反応させることにより行なわれる。溶媒と
しては例えばジオキサン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ又はこれら
の混合溶媒等を使用できる。ヒドラジン水和物の使用量
は、活性化されたカルボキシル基に対して通常５〜２０
倍モル量、好ましくは５〜１０倍モル量とするのがよ
い。反応は通常５０℃以下、好ましくは−２０〜３０℃
にて行なわれる。斯くしてカルボキシル基部分がヒドラ
ジンで置換された化合物（ヒドラジン誘導体）を製造し
得る。

【００２２】カルボキシル基部分がアジドで置換された
化合物は、酸の存在下、適当な溶媒中、上記で得られる
ヒドラジン誘導体と亜硝酸化合物を反応させることによ
り製造される。酸としては通常塩酸が用いられる。溶媒
としては例えばジオキサン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ又はこれ
らの混合溶媒等を使用できる。また亜硝酸化合物として
は、例えば亜硝酸ナトリウム、亜硝酸イソアミル、塩化
ニトロシル等を使用することができる。斯かる亜硝酸化
合物は、ヒドラジン誘導体に対して通常等モル〜２倍モ
ル量、好ましくは等モル〜１．５倍モル量用いられる。
反応は通常−２０〜０℃、好ましくは−２０〜−１０℃
にて行なわれ、一般に５〜１０分程度で終了する。

【００２３】尚、ペプチド結合形成反応は、縮合剤例え
ばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、カルボ
ジイミダゾール等のカルボジイミド試薬やテトラエチル
ピロホスフイン等の存在下に実施することもできる。

【００２４】また、アミノ酸アミドは、対応するアミノ
酸エステルを、通常メタノール性アンモニア、アンモニ
ア水あるいは液体アンモニアと室温に数日程度放置する
ことにより容易に得ることができる。

【００２５】上記の各反応行程及び最終行程において、
保護基の脱離を要する場合、これは通常の脱離反応に従
って行なわれる。該方法としては例えばパラジウム、パ
ラジウム黒等の触媒を用いる水素添加、液体アンモニア
中金属ナトリウムによる還元等の還元的方法、トリフル
オロ酢酸、塩化水素酸、弗化水素、メタンスルホン酸、
臭化水素酸等の強酸によるアシドリシス等を例示するこ
とができる。上記触媒を用いる水素添加は、例えば水素
圧１気圧、０〜４０℃にて行ない得る。触媒の使用量と
しては通常１００ｍｇ〜１ｇ程度とするのがよく、一般
に１〜４８時間程度で反応は終了する。また上記アシド
リシスは、無溶媒下、通常０〜３０℃程度、好ましくは
０〜２０℃程度で約１５分〜１時間程度を要して行なわ
れる。酸の使用量は原料化合物に対し通常５〜１０倍量
程度とするのがよい。該アシドリシスにおいてアミノ基
の保護基のみを脱離する場合は、酸としてトリフルオロ
酢酸又は塩化水素酸を使用するのが好ましい。更に上記
液体アンモニア中金属ナトリウムによる還元は、反応液
がパーマネントブルーに３０秒〜１０分間程度呈色して
いるような量の金属ナトリウムを用い、通常−４０℃〜
−７０℃程度にて行ない得る。

【００２６】上記のようにして製造された式（１）のペ
プチドは、反応混合物からペプチドの分離手段、例えば
抽出、分配、カラムクロマトグラフィー等により単離精
製され、かくして本発明のペプチドを得る。

【００２７】本発明の上記式（１）で表されるペプチド
は、これらに通常の医薬として許容される酸性化合物又
は塩基性化合物を反応させて、容易に塩を形成させるこ
とができる。該酸性化合物としては例えば、塩酸、硫
酸、リン酸、臭化水素酸等の無機酸、シュウ酸、マレイ
ン酸、フマール酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息
香酸等の有機酸を挙げることができ、また該塩基性化合
物としては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化リチウ
ム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウ
ム、炭酸リチウム、炭酸カリウム等の水酸化物及び炭酸
化物及びアンモニア、エチルアミン、ジエチルアミン等
のアミン類等を例示できる。

【００２８】本発明の式（１）で表わされるペプチド及
びそれらの塩は、これを抗菌剤として用いるに当り、そ
のままで又はこれを有効成分として慣用の製剤担体と共
に、ヒト及び動物に投与することができる。その際、投
与経路及び投与単位形態は、特に制限されず、例えば錠
剤、顆粒剤、経口用溶液剤等の経口剤、クリーム、軟膏
剤等の非経口局所投与剤や注射剤等の非経口剤等とし
て、経口的もしくは非経口的に投与できる。

【００２９】有効成分の投与量は、投与経路、投与単位
形態、所望の薬理効果等に応じて適宜決定される。通常
１日当り体重１ｋｇ当りの有効成分投与量は、約０．１
〜５０ｍｇとすればよく、これは１日１回乃至３回に分
けて投与できる。また単位形態中に配合される有効成分
量は約１〜５００ｍｇとするのが適当である。上記の投
与単位形態は、常法に従い容易に製造され、その際用い
得る担体も通常のものでよい。例えば錠剤は、有効成分
を、ゼラチン、澱粉、乳糖、ステアリン酸マグネシウ
ム、滑石、アラビアゴム等の賦形剤と混合して賦形され
る。カプセル剤は有効成分を不活性の製剤充填剤もしく
は希釈剤と混合し、硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセ
ル等に充填される。また注射剤等の非経口用投与薬剤は
有効成分を滅菌した液体担体に溶解又は懸濁して製造さ
れる。好ましい担体は水又は生理食塩水である。

【００３０】

【実施例】以下、本発明ペプチドの製造例を実施例とし
て挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。

【００３１】

【実施例１】 （１）Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ の製造 Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−イソロイシンジシク
ロヘキシルアミン塩（１０．３２ｇ、２５ｍｍｏｌ）を
酢酸エチルに溶かし１０％クエン酸で洗浄し、ジシクロ
ヘキシルアミンを除いた。硫酸マグネシウムで乾燥後、
酢酸エチル層を減圧濃縮して油状物を得た。これを無水
ＴＨＦ（１００ｍｌ）に溶かし食塩−氷浴で約−１０℃
に冷却し、トリエチルアミン（３．５１ｍｌ、２５ｍｍ
ｏｌ）を加え、次いでイソブチルクロロホルメート
（３．２４ｍｌ、２５ｍｍｏｌ）を加え４５分間撹拌し
た。これによく冷却した１．１０Ｎ−ＮＨ₃ ／メタノー
ルを加え終夜撹拌した。減圧濃縮後、水と酢酸エチルを
加えて固体を溶かし酢酸エチル層を１０％クエン酸、飽
和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し硫酸
マグネシウムで乾燥した。減圧濃縮して固体を得た。こ
れをヘキサンで洗浄した。

【００３２】収量：４．０２ｇ（６９．９％） ｍｐ：１６７．５−１６８．５℃。

【００３３】（２）ＨＣｌ・Ｈ−Ｉｌｅ−ＮＨ2 の製造 Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−ＮＨ2(２．３０ｇ、１０ｍｍｏｌ）を
無水ＴＨＦ（２５ｍｌ）に懸濁し氷冷下、４．３５Ｎ−
ＨＣｌ／ＴＨＦ（４６ｍｌ）を加えた後、室温で３時間
３０分撹拌した。減圧濃縮すると固体が得られた。エー
テルで洗浄、乾燥した。

【００３４】収量：１．６１ｇ（９６．１％） ｍｐ：２３５−２３７℃（分解）。

【００３５】 （３）Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ の製造 ＨＣｌ・Ｈ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ （１．６１ｇ、９．６３ｍ
ｍｏｌ）をＤＭＦ（３０ｍｌ）に懸濁し、これに氷冷下
トリエチルアミン（１．３５ｍｌ、９．６３ｍｍｏｌ）
を加え、次いでＢｏｃ−Ａｌａ−ＯＳｕ（２．７６ｇ、
９．６３ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜撹拌した、適
時、トリエチルアミンを加えｐＨを７に調節した。トリ
エチルアミン塩酸塩を濾去後減圧濃縮した。残渣に酢酸
エチルと水を加え溶け残ったゲル状固体を濾取した。こ
れを１０％クエン酸、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶
液、水で順次洗浄した後、乾燥した。

【００３６】収量：２．６６ｇ（９１．６％） ｍｐ：１６６−１６７．５℃ 〔α〕_D ²¹＝−１６．４°（ｃ１．０２、ＤＭＦ） 実測値（％）：Ｃ ５５．９６；Ｈ ９．０７；Ｎ １
３．７５ 計算値（％）（Ｃ_{1 4} Ｈ_{2 7} Ｎ₃ Ｏ₄ ）：Ｃ ５５．７
９；Ｈ ９．０３；Ｎ１３．９４。

【００３７】 （４）ＨＣｌ・Ｈ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ の製造 Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ （１．６３ｇ、５．４
１ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１２ｍｌ）に懸濁し氷冷
下、４．３５Ｎ−ＨＣｌ／ＴＨＦ（２５ｍｌ）を加え
た。一度溶解して均一溶液になった後結晶が析出してき
た。反応が収量するまで室温に３時間撹拌した。これを
減圧濃縮して白色固体を得た。これをエーテルで洗浄し
濾取した。粗結晶をメタノールから再結晶した。

【００３８】収量：１．１７ｇ（８０．７％） ｍｐ：１２７−１２９℃（分解） 〔α〕_D ²¹＝＋８．３°（ｃ１．１４、ＤＭＳＯ） 実測値（％）：Ｃ ４３．２４；Ｈ ８．７５；Ｎ １
６．４４；Ｃｌ １４．１９ 計算値（％）（Ｃ₉ Ｈ_{2 0} Ｎ₃ Ｏ₂ Ｃｌ・０．７５Ｈ₂
Ｏ）：Ｃ ４３．０３；Ｈ ８．６３；Ｎ １６．７
３；Ｃｌ １４．１１。

【００３９】（５）Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣｌＺ）−Ａｌａ
−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ の製造 ＨＣｌ・Ｈ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ （１．００ｇ、
４．２１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に懸濁し氷冷
下トリエチルアミン（０．５９ｍｌ、４．２１ｍｍｏ
ｌ）を加えた。これにＢｏｃ−Ｌｙｓ（ＣｌＺ）−ＯＳ
ｕ（２．５４ｇ、４．２１ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜
撹拌した。析出したトリエチルアミン塩酸塩を濾去した
後、濾液を減圧濃縮して白色固体を得た。これに水と酢
酸エチルを加えて不溶物を濾取し固体を１０％クエン
酸、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水で順次洗浄
した。

【００４０】収量：２．２１ｇ（８７．８％） ｍｐ：１９１−１９３℃ 〔α〕_D ²¹＝−１１．３°（ｃ１．０３、ＤＭＦ） 実測値（％）：Ｃ ５６．０３；Ｈ ７．３４；Ｎ １
１．４６；Ｃｌ ５．８８ 計算値（％）（Ｃ_{2 8} Ｈ_{4 4} Ｎ₅ Ｏ₇ Ｃｌ）：Ｃ ５
６．２３；Ｈ ７．４２；Ｎ １１．７１；Ｃｌ ５．
９３。

【００４１】（６）ＨＣｌ・Ｈ−Ｌｙｓ（ＣｌＺ）−Ａ
ｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ の製造 Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣｌＺ）−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ
₂ （３．０８ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１
２ｍｌ）に懸濁し氷冷下４．３５Ｎ−ＨＣｌ／ＴＨＦ
（２４ｍｌ）を加えた後、室温で約４時間撹拌した。塩
酸塩がゲル状になって析出した。エーテルを加えゲル状
固体を濾取しエーテルで洗浄した。粗結晶をメタノール
−酢酸エチルで再結晶した。

【００４２】収量：２．４５ｇ（８９．０％） ｍｐ：２２０−２２２℃（分解） 〔α〕_D ²¹＝−４．７°（ｃ１．０８、ＤＭＳＯ） 実測値（％）：Ｃ ５０．４６；Ｈ ７．０６；Ｎ １
２．７３；Ｃｌ １２．１７ 計算値（％）（Ｃ_{2 3} Ｈ_{3 7} Ｎ₅ Ｏ₅ Ｃｌ₂ ・０．７５
Ｈ₂ Ｏ）：Ｃ ５０．４１；Ｈ ７．０８；Ｎ １２．
７８；Ｃｌ １２．９４。

【００４３】（７）Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＣｌＺ）
−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ の製造 ＨＣｌ・Ｈ−Ｌｙｓ（ＣｌＺ）−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ
₂ （２．８２ｇ、５．２８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６０ｍ
ｌ）に懸濁し氷冷下トリエチルアミン（０．７４ｍｌ、
５．２８ｍｍｏｌ）を加えた。これにＢｏｃ−Ａｌａ−
ＯＳｕ（１．５１ｇ、５．２８ｍｍｏｌ）を加え室温で
終夜撹拌した。これを減圧濃縮して残渣に酢酸エチルを
加え不溶物を濾取した。この固体を酢酸エチル、１０％
クエン酸、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水で順
次洗浄した。

【００４４】収量：３．３０ｇ（９３．５％） ｍｐ：２３５℃（半融）、２４９−２５０．５℃（分
解） 〔α〕_D ²¹＝−１８．３°（ｃ１．０２、ＤＭＳＯ） 実測値（％）：Ｃ ５５．６２；Ｈ ７．３０；Ｎ １
２．５７；Ｃｌ ５．３５ 計算値（％）（Ｃ_{3 1} Ｈ_{4 9} Ｎ₆ Ｏ₈ Ｃｌ）：Ｃ ５
５．６４；Ｈ ７．３８；Ｎ １２．５６；Ｃｌ ５．
３０。

【００４５】（８）ＨＣｌ・Ｈ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｃｌ
Ｚ）−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ の製造 Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＣｌＺ）−Ａｌａ−Ｉｌｅ−
ＮＨ₂ （６５０ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）を１．５Ｎ−
ＨＣｌ／酢酸（１３ｍｌ）に溶かし室温で約１時間撹拌
した。これを減圧濃縮して白色固体を得た。エーテルを
加えて濾取し、粗結晶をメタノール−エーテルで再結晶
した。

【００４６】収量：５３２ｇ（９０．５％） ｍｐ：２３３−２３５℃（分解） 〔α〕_D ²¹＝−９．５°（ｃ０．９９、ＤＭＦ：ＤＭＳ
Ｏ＝１：１） 実測値（％）：Ｃ ５０．４６；Ｈ ７．０３；Ｎ １
３．４７；Ｃｌ １１．２１ 計算値（％）（Ｃ_{2 6} Ｈ_{4 2} Ｎ₆ Ｏ₆ Ｃｌ₂ ・０．７５
Ｈ₂ Ｏ）：Ｃ ５０．４４；Ｈ ７．０８；Ｎ １３．
５８；Ｃｌ １１．４５。

【００４７】（９）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｌａ
−Ｌｙｓ（ＣｌＺ）−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ の製造 ＨＣｌ・Ｈ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＣｌＺ）−Ａｌａ−Ｉｌ
ｅ−ＮＨ₂ （２４５ｍｇ、４０５ｍ−ｍｏｌ）をＤＭＦ
（５ｍｌ）に懸濁し氷冷下トリエチルアミン（５７μ
ｌ、０．４０５ｍｍｏｌ）を加えた。これにＢｏｃ−Ｓ
ｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＳｕ（２３６ｍｇ、０．４０５ｍｍ
ｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。これに酢酸エチルを
加えゲル状沈澱を濾取し酢酸エチルで十分洗浄した。次
いで、この固体を水、１０％クエン酸、水で洗浄し乾燥
した。

【００４８】収量：２７４ｇ（８０．１％） 粗結晶をメタノールより再結晶した。

【００４９】収量：２３２ｇ（６７．８％） ｍｐ：２４２℃（半融）、２５３−２５６℃（分解） 〔α〕_D ²¹＝−８．９°（ｃ０．９６、ＤＭＦ：ＤＭＳ
Ｏ＝１：１） 実測値（％）：Ｃ ５７．９６；Ｈ ７．１９；Ｎ １
１．３４；Ｃｌ ４．０１ 計算値（％）（Ｃ_{4 1} Ｈ_{6 0} Ｎ₇ Ｏ_{1 0} Ｃｌ）：Ｃ ５
８．１８；Ｈ ７．１４；Ｎ １１．５８；Ｃｌ ４．
１９ アミノ酸分析値（Ｉｌｅ＝１．００としたとき） Ｓｅｒ ０．９６（１） Ａｌａ ２．０２（２） Ｉｌｅ １．００（１） Ｌｙｓ １．０５（１）。

【００５０】（１０）Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａ
ｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ の製造 Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＣｌＺ）
−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ （１０４．４ｍｇ、０．１２
３ｍｍｏｌ）とアニソール１０４μｌを反応管に入れ、
ドライアイス−エタノール浴冷却下に無水フッ化水素５
ｍｌを導入し、氷冷下１時間撹拌した。無水フッ化水素
を氷冷下に減圧留去した。残渣に水を加え、エーテルで
洗い水層に６Ｎ塩酸４００μｌを加えて凍結乾燥した。
得られた白色粉末を調製用高速液体クロマトグラフィー
（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ_{1 8} ６×２５０ｍｍ、１％−
１０％アセトニトリル−０．０１Ｎ塩酸）で分取し凍結
乾燥した。

【００５１】白色粉末。

【００５２】収量：５７．４ｇ（８３．１％） ｍｐ：２１１−２１３℃（分解） 〔α〕_D ²⁰＝−６８．９°（ｃ１．１２、１２．５％酢
酸水溶液） アミノ酸分析値（６Ｎ塩酸、１１０℃、３５時間） Ｓｅｒ １．００（１） Ａｌａ ２．００（２） Ｉｌｅ １．０４（１） Ｌｙｓ ０．９４（１） 分析用高速液体クロマトグラフィー（実施例１と同様の
条件）での保持時間：７．４ｍｉｎ，

【００５３】

【抗菌活性試験】グラム陰性菌及びグラム陽性菌に対す
る本発明ペプチドの抗菌作用を調べるため、液体希釈法
によって３７℃、５時間培養による最小増殖阻止濃度
（ＭＩＣ）を求めた〔「抗生物質の基礎知識」南山堂、
１９７０年１月２５日発行、Ｐ４５〜５５、改訂第３版
参照〕。尚、供試菌としては、以下の各菌株を１×１０
⁶ 菌数／ｍｌ（ハートインフェージョンブロス）デイフ
コ社）に調製して用いた。

【００５４】＜グラム陰性菌＞ ・Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ １２８７ ・Ｓｈ．ｓｏｎｎｅｉ ＥＷ−３３ ・Ｓａｌ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ ＩＦＯ３３１３ ・Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ Ｉ
ＦＯ１３５３４ ・Ｅ．ｃｏｌｉ ＮＩＨＪ ＪＣ−２ ・Ｐｓ，ａｅｒｏｇｉｎｏｓａ ＮＣＴＣ１０４９０ ＜グラム陽性菌＞ ・Ｓｔｒ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＩＩＤ Ｓ−３２ ・Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ６６３３ ・Ｓｔａ．ａｕｒｅｕｓ ＦＤＡ２９０Ｐ その結果、特に、式（１）のペプチドはＰ．ｍｉｒａｂ
ｉｌｉｓ１２８７に対して６３γ／ｍｌ及びＰｓ．ａｅ
ｒｕｇｉｎｏｓａＮＣＴＣ１０４９０に対して１２５γ
／ｍｌの抗菌活性を示し、これらの値は本発明者が先に
開発した蚕由来の抗菌活性ペプチドのそれと同等である
か或いはこれをも凌ぐ強力なものであった。

【００５５】

【製剤例１】 注射用蒸留水に本発明ペプチド及びブドウ糖を溶解させ
た後、５ｍｌのアンプルに注入する。窒素で置換後滅菌
して注射剤を得る。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式 Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＮＨ₂ で表わされるアミノ酸配列を有するペプチド。