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JPH084499B2 - 加水分解酵素活性促進剤 - Google Patents
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JPH084499B2 - 加水分解酵素活性促進剤 - Google Patents

加水分解酵素活性促進剤

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JPH084499B2
JPH084499B2 JP61084455A JP8445586A JPH084499B2 JP H084499 B2 JPH084499 B2 JP H084499B2 JP 61084455 A JP61084455 A JP 61084455A JP 8445586 A JP8445586 A JP 8445586A JP H084499 B2 JPH084499 B2 JP H084499B2
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JP
Japan
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blood
blood coagulation
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hydrolase activity
activity promoter
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秀雄 安楽
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Sekisui Chemical Co Ltd
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Sekisui Chemical Co Ltd
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Description

【発明の詳細な説明】 (産業上の利用分野) 本発明は加水分解酵素活性促進剤,特に血液凝固第XI
I因子などのセリンプロテアーゼ前駆体の活性化および
活性化された該因子の酵素活性を促進し,血液凝固促進
剤として有用な加水分解酵素活性促進剤に関する。
(従来の技術) 検査技術の目覚ましい進歩とあいまって血清生化学検
査,血清免疫学検査,血球検査などの血液検査が広く普
及し,病気予防や早期診断に役立っている。血液検査の
多くは血清検査であり,その検査に要する血清は,通
常,血液検査用容器に採取した血液を凝固させた後,遠
心分離によって,比重の異なる血餅(フィブリンと血球
が混合したゲル様塊状物)から分離し,ピペットを用い
て,あるいはデカンテーションにより採取している。
被験者から採取された血液が凝固するには比較的長時
間を必要とする。例えば,血液凝固時間が比較的短いと
されるガラス製検査容器を用いても血液が凝固するまで
に40〜60分を必要とし,合成樹脂製検査容器を用いる
と,実に4時間以上の放置時間が必要となる。そのた
め,検査に必要な血清を迅速に確保できないという欠点
を有する。これは,特に緊急に検査を実施する必要のあ
る場合に問題となる。
血液を速やかに凝固させるため血液凝固促進剤が使用
される。例えば,血液中の第XII因子(接触因子)を活
性化する血液凝固促進剤が用いられる。第XII因子は血
液凝固に係る蛋白質加水分解酵素前駆体の一種であり,
これが活性化することにより血液中の他の血液凝固因子
が連鎖的に活性化され血液凝固が始まる。第XII因子活
性促進剤としては,従来からガラス,カオリン,ベント
ナイト,シリカなどの無機微粒子やエラジン酸が知られ
ているが,これらを血液凝固促進剤として用いても,そ
の純度や組成により血液凝固時間などにバラツキがあ
る。発明者は,血液凝固促進剤に利用されうる加水分解
酵素活性促進剤として下記一般式で示され,かつ,該式
中の隣接するカルボニル基が実質的に同一平面上に存在
する環式有機化合物を提案している(特開昭60−115519
号公報): (ここで,Aは環式化合物の残基を示す)。
上記化合物としては例えば,没食子酸アルキルエステル
酸化物,エラジン酸酸化物などが挙げられる。これらの
加水分解酵素活性促進剤は比較的短時間で血液を凝固さ
せることができ,血液凝固に要する時間にも大きなバラ
ツキがない。
(発明が解決しようとする問題点) 発明者は上記環式化合物をさらに検討し,優れた血液
凝固促進剤となりうる加水分解酵素活性促進剤の開発を
試みた。本発明の目的は,優れた血液凝固促進剤となり
うる加水分解酵素活性促進剤を提供することにある。
(問題点を解決するための手段および作用) 本発明の加水分解酵素活性促進剤は,下記一般式
(I)で示されるo−キノン環を有する化合物,1・2・
3−トリケトヒドロインデン又は下記一般式(II)で示
される異節環式化合物を配位子とするo,o−配位性を有
する金属錯体からなり,そのことにより上記目的が達成
される: (ここで,R1,R2,R3およびR4は,水素,炭化水素基,
極性置換基または多環式化合物における残基を示す) (ここで,R6は水素,炭化水素基または多環式化合物に
おける残基を示し,R7およびR8は,水素,炭化水素基,
極性置換基または多環式化合物における残基を示す)。
上記式(I)において炭化水素基は特に限定されない
が,アルキル基,特に炭素数1〜18のアルキル基が好ま
しい。極性置換基も特に限定されない。例えば,カルボ
キシル基,カルボン酸エステル基,水酸基,アミノ酸,
メルカプト基などがある。o−キノン環を有する化合物
としては,o−キノンをはじめ,下記式(III)〜(VII)
で示される化合物が挙げられる: 没食子酸アルキルエステル酸化物 (ここで,R5はアルキル基を示す。) エラジン酸部分酸化物 エラジン酸完全酸化物 1・4−ジ(3・4−ジヒドロキシフェニル) 2・3−ジメチルブタン部分酸化物 1・4−ジ(3・4−ジヒドロキシフェニル) 2・3−ジメチルブタン完全酸化物 前述の1・2・3−トリケトヒドロインデンは,下記
式(VIII)で示される化合物である。
前記一般式(II)で示される異節環式化合物において
炭化水素基および極性置換基については(I)式と同様
である。
(II)式で示される化合物の好ましい具体例として
は,例えば,次式で表されるイサチンがある。
錯体を形成する金属は,o,o−配位性を有するアルカリ
金属以外の金属である。特にFe,Co,Ni,Alなどを含む錯
体が取り扱いが容易であるため好適である。本発明の加
水分解酵素活性促進剤である金属錯体は上記配位子とな
る化合物(I),1・2・3−トリケトヒドロインデン又
は化合物(II)に上記金属イオンを含む塩溶液を加えて
得られる。例えば,没食子酸プロピル酸化物の鉄錯体
は,没食子酸プロピル酸化物を含む溶液に塩化第二鉄溶
液を混合することにより得られる。このような金属錯体
には,錯体内部の電気的中性を保つためにハロゲン根,
硫酸根,硝酸根,アンモニウム根の1種または2種以上
を含む配位子が含有されていてもよい。水が配位子とし
て含有されていてもよい。
本発明の加水分解酵素活性促進剤を血液凝固促進剤と
して利用する場合は,血液1mlにつきこの加水分解酵素
活性促進剤(金属錯体)を1×10-10〜1×10-1gの割
合で使用する。過少であると血液凝固促進効果が乏し
い。過剰であっても使用量に比例した効果は得られな
い。
使用される血液検査用容器はガラス製であっても樹脂
製であってもよい。血液を凝固させるには,例えば容器
中に採取した血液に血液凝固促進剤を加えてもよく,血
液凝固促進剤をあらかじめ容器内部に付与しておいても
よい。血液凝固促進剤は,例えば粉末状のまま利用して
もよく,あらかじめ適当な溶媒に溶解もしくは分散させ
ておいてもよい。血液凝固促進剤を粉末状で,あるいは
高濃度の溶液として利用する場合に,血液の一部が高濃
度の金属錯体と接触して血液中の蛋白成分が変質するお
それのあるときには,上記血液凝固促進剤を比表面積の
大きい担体に担持させることが推奨される。
このような方法に利用される担体としては,血液検査
に有害な影響を与えず,大きい比表面積を有するもので
あれば,特に限定されない。例えば,不織布,織布,樹
脂ビーズなどが好適に用いられる。このような担体に上
記血液凝固促進剤を担持させるには,例えば,その溶液
や分散液を担体に塗布したり,溶液や分散液中に担体を
浸漬して含浸させた後,乾燥させる。アラビアゴムなど
の適宜の助剤を含む血液凝固促進剤の水分散液を調製
し,これを急速凍結乾燥して血液凝固促進剤担持粒子状
物を得ることもできる。
本発明加水分解酵素活性促進剤は,蛋白質分解酵素,
特に,セリンプロテアーゼの活性を促進する。セリンプ
ロテアーゼは,ペプチド鎖におけるArgと任意のアミノ
酸残基,およびLysと任意のアミノ酸残基,との間の結
合を加水分解により切断する能力を有する。そのため本
発明の加水分解酵素活性促進剤を血液凝固促進剤として
利用するとセリンプロテアーゼ前駆体である第XII因子
の活性化および活性化された該因子の酵素活性が促進さ
れ,その結果,短時間で血液が凝固する。血液凝固に要
する時間は,金属錯体の種類や量,容器の材質,周囲の
温度などにより異なるが,合成樹脂製容器の場合は,通
常20〜30分である。
本発明の化合物は,金属錯体であるため,発明者が先
に開発した加水分解酵素活性促進剤である従来の技術の
項で述べた環式有機化合物に比べて,さらに熱安定性に
優れる。上記環式有機化合物を血液凝固促進剤として利
用したときには,血液中の金属成分と錯体を形成し血清
成分に変化を与えるおそれがあるが,本発明の化合物は
血液中の金属成分と反応することがないため,正確な検
査値が得られる。
(実施例) 以下に本発明を実施例につき説明する。
実施例1 没食子酸n−プロピル酸化物鉄錯体(血液凝固促進
剤)の0.1重量%生理食塩水分散液50μlを市販のポリ
メチルメタクリレート製スピッツに入れ,これに人新鮮
血5mlを採取し,23℃で静置した。血餅収縮が始まり,血
清の滲出が認められた時間を血液凝固時間とした。血清
の滲出が認められたら直ちに遠心分離器を用い,1000Gで
5分間遠心分離を行い,血清の分離状態を目視観察し
た。それぞれの結果を下表に示す。実施例2〜8および
比較例1〜2の結果もあわせて下表に示す。
実施例2 血液凝固促進剤としてエラジン酸酸化物(7頁(V)
式で示される化合物)の鉄錯体を用いたこと以外は実施
例1と同様である。
実施例3 血液凝固促進剤として1・2・3−トリケトヒドロイ
ンデンの鉄錯体を用いたこと以外は実施例1と同様であ
る。
実施例4 血液凝固促進剤としてイサチンの鉄錯体を用いたこと
以外は実施例1と同様である。
実施例5 血液凝固促進剤として1・4−ジ(3・4−ジヒドロ
キシフェニル)2・3−ジメチルブタン酸化物の鉄錯体
を用いたこと以外は実施例1と同様である。
実施例6 鉄錯体の代わりにコバルト錯体を用いたこと以外は実
施例2と同様である。
実施例7 鉄錯体の代わりにニッケル錯体を用いたこと以外は実
施例2と同様である。
実施例8 鉄錯体の代わりにアルミニウム錯体を用いたこと以外
は実施例2と同様である。
比較例1 血液凝固促進剤を使用しなかったこと以外は実施例1
と同様である。
比較例2 ガラス製スピッツを用い,かつ血液凝固促進剤を使用
しなかったこと以外は実施例1と同様である。
(発明の効果) 本発明によれば,このように,蛋白質加水分解酵素活
性促進剤が得られる。この活性促進剤は,特にセリンプ
ロテアーゼの活性を促進する。このような化合物を血液
凝固促進剤として利用すると血液が短時間のうちに凝固
する。しかも,血清成分を変化させることがないため,
血清を用いた各種検査の検査値が常時正確かつ安定に得
られうる。本発明の加水分解酵素活性促進剤はその製造
および精製が簡単である。しかも,それ自体,比較的熱
に安定であるため長期保存にも適する。このような加水
分解酵素活性促進剤は,血液凝固促進剤として,あるい
は各種生化学試験用に好適に利用されうる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 A61K 31/40 31/555 38/46 ACA

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】下記一般式(I)で示されるo−キノン環
    を有する化合物,1・2・3・−トリケトヒドロインデン
    又は下記一般式(II)で示される異節環式化合物を配位
    子とするo,o−配位性を有する金属錯体からなる加水分
    解酵素活性促進剤: (ここで、R1,R2,R3およびR4は,水素,炭化水素基,
    極性置換基または多環式化合物における残基を示す) (ここで、R6は水素,炭化水素基または多環式化合物に
    おける残基を示し,R7およびR8は水素,炭化水素基,極
    性置換基または多環式化合物における残基を示す)。
  2. 【請求項2】前記加水分解酵素がセリンプロテアーゼで
    ある特許請求の範囲第1項に記載の加水分解酵素活性促
    進剤。
  3. 【請求項3】前記加水分解酵素が血液凝固第XII因子で
    ある特許請求の範囲第2項に記載の加水分解酵素活性促
    進剤。
JP61084455A 1986-04-11 1986-04-11 加水分解酵素活性促進剤 Expired - Lifetime JPH084499B2 (ja)

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EP87303182A EP0241314B1 (en) 1986-04-11 1987-04-10 An accelerator of the activity of hydrolase
US07/036,886 US5041558A (en) 1986-04-11 1987-04-10 Accelerator of the activity of hydrolase
CA000534473A CA1313997C (en) 1986-04-11 1987-04-10 Accelerator of the activity of hydrolase
DE3750344T DE3750344T2 (de) 1986-04-11 1987-04-10 Beschleuniger der Aktivität von Hydrolase.
KR1019870003408A KR950006614B1 (ko) 1986-04-11 1987-04-10 혈액응고 촉진방법
AU71424/87A AU619442C (en) 1986-04-11 1987-04-10 An accelerator of the activity of hydrolase
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