【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
本発明は家禽類のコクシジウム症を免疫的に予
防し得る抗コクシジウム剤および該抗コクシジウ
ム剤の接種方法に関する。
家禽類すなわち鶏、七面鳥、うずら、ほろほろ
鳥などのコクシジウム症はある種の寄生性原虫の
感染により起きる伝染病で世界各国に広く分布し
ている。コクシジウム症はたとえば鶏ではアイメ
リア・テネラ（Eimeria，tenella）、アイメリ
ア・アセルブリナ（E.acervulina）、アイメリ
ア・ネカトリツクス（E.necatrix）、アイメリ
ア・ブルネツテイ（E.brunetti）、アイメリア・
マキシマ（E.maxima）、などにより、七面鳥で
はアイメリア・メレアグリミテイス（E.
meleagrimitis）、アイメリア・アデノイデス（E.
adenoides）、アイメリア・ガロパボニス（E.
gallopovonis）などにより、うずらではアイメリ
ア・ウズラ（E.uzura）、アイメリア・ツノダイ
（E.tsunodai）などにより、そしてほろほろ鳥で
はアイメリア・グレニエリ（E.grenieri）、アイ
メリア・ヌミダエ（E.numidae）などにより惹起
されることが知られている。これに感染した動物
は下痢、血便等の症状を呈し、治療が遅れた場合
または症状が重い場合には斃死することも少なく
ない。
そして斃死に至らなくても発育が阻害されるた
めにコクシジウム症は家禽飼育業者にとつては最
も被害の大きい疾患の一つとされてきた。
従来、かかるコクシジウム症の予防としてはワ
クチンを含めて薬剤の経口投与が行われている。
コクシジウム症のワクチン（主に鶏について行
なわれている）はコクシジウム症を起しやすい数
種類のオーシストの混合液であり、このものを家
禽に経口投与するものである。しかしながら、こ
うした薬剤の投与による予防法は薬剤の耐性獲得
による効果の減退等の問題があり、またワクチン
による予防法は投与量によつては副作用が発現す
る可能性があつた。
本発明者らは前記問題を解決すべく研究を行つ
た結果、家禽類のコクシジウム原虫の１種である
アイメリア・テネラのスポロゾイトが家禽類の抗
コクシジウ剤として有効であることを見出して先
に出願した（特公昭63−54692号公報；特許第
1504463号）。そして更に研究を続けた結果、アイ
メリア・テネラ以外の家禽類のコクシジウム原虫
のスポロゾイトも抗コクシジウム剤として有効で
あること、しかもそれを家禽類の総排泄腔に接種
するのが一層有効であることを見出した。
したがつて、本発明はアイメリア・テネラを除
く家禽類のコクシジウム原虫のスポロゾイトを活
性成分とする抗コクシジウム剤である。
更に、本発明はアイメリア・テネラを除く家禽
類のコクシジウム原虫のスポロゾイトを活性成分
とする抗コクシジウム剤を家禽類の総排泄腔に接
種することを特徴とする家禽類のコクシジウム症
の予防法を包含する。
本発明で云うスポロゾイトはコクシジウム原虫
の発育環の一形態であり、生きているものを指
す。またスポロゾイトの他にスポロシストやオー
シストもしくはそれらの皮膜などの存在すること
を妨げないこのスポロゾイトの調製法の例を示す
と次のようである。
コクシジウム症に感染した家禽類の糞、腸管壁
および腸管内容物から分離したコクシジウム原虫
の成熟オーシストの皮膜を磨砕してスポロシスト
を得る。次いでこのスポロシストに家禽の胆汁お
よびトリプシンを作用させてスポロゾイトを得
る。このようにして得られたものは主としてスポ
ロゾイトを含むものである。
次いで前記スポロゾイトを水、生理食塩水、緩
衝液等に懸濁せしめて使用するか、または固形状
に加工して接種してもよい。懸濁液に関しては付
着性または粘稠性を与えるように加工してもよ
い。接種部位としては口腔、筋肉および総排泄腔
が挙げられるが、特に総排泄腔に接種するのが好
ましい。総排泄腔接種の具体的方法としては家禽
類の肛門にたらすか、または注入、挿入、スプレ
ーなどの方法が挙げられる。スポロゾイトの接種
量は１羽当り約500個以上がよい。
本発明に係る抗コクシジウム剤を用いれば副作
用を起こすことなく家禽類のコクシジウム症をほ
とんど完全に予防し得る。また本発明の抗コクシ
ジウム剤は他の家禽類予防及び治療剤例えばニユ
ーカツスル病ワクチンまたは伝染性コリーザ治療
剤のごときと併用または同時適用しても差支えな
い。更にコクシジウム症感染防御効果も例えば初
生雛に本発明の抗コクシジウム剤を接種した場
合、11週以上の長期間にわたり非常に有効なもの
である。
次に本発明の実施例を示し、効果について説明
する。
実施例 １
鶏の初生雛（ブロイラー専用種ハバード）10羽
の肛門に下記に示すアイメリア・ブルネツテイの
試料を１羽当り１滴（スポロゾイトとして１万
個）をたらした〔本発明、比較例１，２，３およ
び４〕。またオーシストを初生雛に経口接種した。
〔比較例５〕。
次いで、この鶏に21日令において１羽当り５万
個のアイメリア・ブルネツテイの成熟オーシスト
を経口投与してコクシジウム症に感染させた。感
染後７日目に腸下部病変と糞中オーシスト数を観
察した。
試料及び接種方法
本発明：アイメリア・ブルネツテイのスポロゾ
イト330000個をPBS（−）溶液１ml中に懸濁せし
めたもの。
比較例(1)：アイメリア・ブルネツテイのスポロ
シスト165000個（スポロゾイト）として330000
個）をPBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたも
の。
比較例(2)：アイメリア・ブルネツテイのオーシ
スト41250個（スポロゾイトとして330000個を
PBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
比較例(3)：本発明の試料を60℃において30分間
加熱したもの。
比較例(4)：アイメリア・ブルネツテイのスポロ
ゾイト330000個を10％ホルマリン溶液に入れ30分
間放置し、次いでこの溶液を遠心分離し、沈澱を
PBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
比較例(5)：鶏１羽当りアイメリア・ブルネツテ
イのオーシスト1250個を経口接種する。
試料に用いたオーシスト、スポロシストおよび
スポロゾイトの調製は、「J.Protozool.」第９巻
(2)154〜161頁（1962）に記載されている方法に基
づいて以下のように行つた。
アイメリア・ブルネツテイの成熟オーシストを
経口投与した鶏の糞、盲腸壁および盲腸内容物を
集め、３％重クロム酸カリウム溶液に浮遊せし
め、そして28℃において２日間培養した。
得られた成熟オーシストを含む溶液を遠心分離
（3000rpm、10分間）し、そして沈澱を集める。
次にこの沈澱を水で洗浄し且つ飽和食塩水を添加
する。この溶液を遠心分離（3000rpm、10分間）
し、上澄みを採り、この上澄みを水で希釈し、希
釈液を更に遠心分離（1000rpm、３分間）し、そ
して沈澱を集める。この沈澱はほとんどオーシス
トのみよりなる［比較例(2)で使用］。前記オーシ
ストに水および５％次亜塩素酸ナトリウム液を加
え且つ15分間放置した後、遠心分離（2000rpm、
３分間）を行う。得られた沈澱を水で洗浄し、次
いでホモジナイザーで磨砕する。この磨砕物はほ
とんどスポロシトよりなる［比較例１で使用］。
このスポロシストに５％鶏胆汁および0.25％トリ
プシンPBS（−）溶液を加え、そして40℃の温浴
中でおよそ1.5時間消化せしめる。得られた消化
液を遠心分離して沈澱を集め、そしてこの沈澱を
PBS（−）溶液で洗浄する。
このものはほとんどスポロゾイトよりなる（本
発明試料として使用）。
上記の結果を下記の表１に示す。表１中の評価
は下記により行つた。
［評価方法］
腸下部病変カタール性浸出物
：重度
：中程度
＋：軽度
⊥：極軽度
−：なし
糞中のオーシスト数
糞1g中のオーシスト数を表す。
The present invention relates to an anti-coccidial agent capable of immunologically preventing coccidiosis in poultry, and a method for inoculating the anti-coccidial agent. Coccidiosis of poultry, such as chickens, turkeys, quail, and guinea fowl, is an infectious disease caused by infection with a certain type of parasitic protozoan, and is widely distributed around the world. For example, in chickens, coccidiosis is caused by Eimeria tenella, E. acervulina, E. necatrix, E. brunetti, Eimeria
Maxima (E.maxima), etc., and Eimeria meleagrimiteis (E.
meleagrimitis), Eimeria adenoides (E.
adenoides), Eimeria galopabonis (E.
In quails, E.uzura and E.tsunodai, etc., and in guinea fowl, E.grenieri, E.numidae, etc. It is known that Infected animals exhibit symptoms such as diarrhea and bloody stools, and often die if treatment is delayed or the symptoms are severe. Coccidiosis has been considered one of the most damaging diseases for poultry breeders because it inhibits growth even if it does not lead to mortality. Conventionally, to prevent such coccidiosis, drugs including vaccines have been orally administered. Coccidiosis vaccines (mainly used in chickens) are a mixture of several types of oocysts that are susceptible to coccidiosis, and this is orally administered to poultry. However, these methods of prophylaxis by administering drugs have problems such as decreased effectiveness due to the acquisition of drug resistance, and prophylaxis methods using vaccines may cause side effects depending on the dose administered. As a result of research to solve the above problem, the present inventors discovered that sporozoites of Eimeria tenella, a type of poultry coccidia protozoa, are effective as an anti-coccidiosis agent for poultry, and filed an application earlier. (Special Publication No. 63-54692; Patent No.
No. 1504463). As a result of further research, we found that sporozoites of poultry coccidia protozoa other than Eimeria tenella are also effective as anti-coccidial agents, and that it is even more effective to inoculate them into the cloaca of poultry. I found it. Therefore, the present invention is an anti-coccidial agent containing sporozoites of poultry coccidian protozoa other than Eimeria tenella as an active ingredient. Furthermore, the present invention includes a method for preventing coccidiosis in poultry, which comprises inoculating into the cloaca of the poultry an anti-coccidial agent containing sporozoites of coccidian protozoa of poultry other than Eimeria tenella as an active ingredient. do. The sporozoite referred to in the present invention is a form of the growth ring of coccidia protozoa, and refers to a living sporozoite. An example of a method for preparing sporozoites that does not prevent the presence of sporocysts, oocysts, or their membranes in addition to sporozoites is as follows. Sporocysts are obtained by grinding the membranes of mature oocysts of coccidian protozoa isolated from the feces, intestinal wall, and intestinal contents of poultry infected with coccidiosis. Next, the sporocysts are treated with poultry bile and trypsin to obtain sporozoites. The product thus obtained mainly contains sporozoites. Next, the sporozoites may be used after being suspended in water, physiological saline, a buffer solution, etc., or may be processed into a solid form and inoculated. Suspensions may be processed to give them adhesive or viscous properties. Inoculation sites include the oral cavity, muscle, and cloaca, and it is particularly preferable to inoculate the cloaca. Specific methods for cloacal inoculation include dropping into the anus of poultry, injection, insertion, and spraying. The amount of sporozoites inoculated is preferably about 500 or more per bird. By using the anti-coccidial agent according to the present invention, coccidiosis in poultry can be almost completely prevented without causing side effects. Furthermore, the anti-coccidiosis agent of the present invention may be used in combination or simultaneously with other poultry preventive and therapeutic agents, such as Newcatus disease vaccine or infectious coryza therapeutic agents. Furthermore, the effect of preventing coccidiosis infection is very effective for a long period of 11 weeks or more, for example, when day-old chicks are inoculated with the anti-coccidiosis agent of the present invention. Next, examples of the present invention will be shown and effects will be explained. Example 1 One drop (10,000 sporozoites) of the Eimeria brunetsutei sample shown below was applied to the anus of 10 first-born chicken chicks (broiler-specific Hubbard) per bird [the present invention, Comparative Example 1, 2, 3 and 4]. Oocysts were also orally inoculated to day-old chicks.
[Comparative Example 5]. The chickens were then infected with coccidiosis by orally administering 50,000 mature oocysts of Eimeria brunetsutii per chicken at 21 days of age. Seven days after infection, lower intestinal lesions and the number of fecal oocysts were observed. Sample and inoculation method The present invention: 330,000 sporozoites of Eimeria brunetsutei suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative example (1): 330,000 as 165,000 sporocysts (sporozoites) of Eimeria brunetsutei
) suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative example (2): 41,250 oocysts (330,000 sporozoites) of Eimeria brunetsutei
Suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative example (3): A sample of the present invention was heated at 60°C for 30 minutes. Comparative example (4): 330,000 sporozoites of Eimeria brunetsutei were placed in a 10% formalin solution and left for 30 minutes, then this solution was centrifuged to remove the precipitate.
Suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative Example (5): 1250 oocysts of Eimeria brunetsutei are orally inoculated per chicken. The preparation of oocysts, sporocysts, and sporozoites used as samples is described in "J.Protozool." Volume 9.
(2) The following procedure was carried out based on the method described on pages 154 to 161 (1962). The feces, cecal wall, and cecal contents of chickens to which mature oocysts of Eimeria brunettii were orally administered were collected, suspended in a 3% potassium dichromate solution, and cultured at 28°C for 2 days. The resulting solution containing mature oocysts is centrifuged (3000 rpm, 10 minutes) and the precipitate is collected.
The precipitate is then washed with water and saturated brine is added. Centrifuge this solution (3000 rpm, 10 minutes)
Collect the supernatant, dilute the supernatant with water, further centrifuge the diluted solution (1000 rpm, 3 minutes), and collect the precipitate. This precipitate consists almost exclusively of oocysts [used in Comparative Example (2)]. After adding water and 5% sodium hypochlorite solution to the oocysts and leaving for 15 minutes, centrifugation (2000 rpm,
3 minutes). The precipitate obtained is washed with water and then ground in a homogenizer. This ground material consists mostly of sporocites [used in Comparative Example 1].
A 5% chicken bile and 0.25% trypsin PBS (-) solution is added to the sporocysts and digested in a 40°C bath for approximately 1.5 hours. The resulting digestive fluid is centrifuged to collect the precipitate, and this precipitate is
Wash with PBS(-) solution. This substance consists mostly of sporozoites (used as a sample of the present invention). The above results are shown in Table 1 below. The evaluation in Table 1 was performed as follows. [Evaluation method] Catalytic exudate from lower intestinal lesions: Severe: Moderate +: Mild ⊥: Very mild -: None Number of oocysts in feces Represents the number of oocysts in 1 g of feces.
【表】
実施例 ２
鶏の初生雛（実施例１で用いたものと同じ鶏
種）10羽の肛門に下記に示すアイメリア・ネカト
リツクスの試料を１羽当り１滴（スポロゾイトと
して１万個）をたらした〔本発明、比較例１，
２，３および４〕。またはオーシストを初生雛に
経口接種した〔比較例(5)〕。
次いで、この鶏に21日令において１羽当り５万
個のアイメリア・ネカトリツクスの成熟オーシス
トを経口投与してコクシジウム症に感染させた。
感染後６日目に小腸病変出血および斃死率につい
て観察した。
試料及び接種方法
本発明：アイメリア・ネカトリツクスのスポロ
ゾイト330000個をPBS（−）溶液１ml中に懸濁せ
しめたもの。
比較例(1)：アイメリア・ネカトリツクスのスポロ
シスト165000個（スポロゾイトとして330000個）
をPBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
比較例(2)：アイメリア・ネカトリツクスのオーシ
スト41250個（スポロゾイトとして330000個）を
PBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
比較例(3)：本発明の試料を60℃において30分間加
熱したもの。
比較例(4)：アイメリア・ネカトリツクスのスポロ
ゾイト330000個を10％ホルマリン溶液に入れ30分
間放置し、次いでこの溶液を遠心分離し、沈澱を
PBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
比較例(5)：鶏１羽当りアイメリア・ネカトリツク
スのオーシスト1250個を経口接種する。
試料に用いたオーシスト、スポロシストおよび
スポロゾイトの調製法は実施例１のアイメリア・
ブルネテイをアイメリア・ネカトリツクスに置き
かえ且つ、消化時間を１時間とした以外は同様の
方法で行つた。
上記の結果を下記の表２に示す。表２中の小腸
病変出血の評価は実施例１における腸下部病変カ
タール性浸出物の評価程度に準じて行つた。
表 ２
小腸病変出血 斃死率（％）
本発明 − ０
比較例(1) 80
比較例(2) 90
比較例(3) 80
比較例(4) 30
比較例(5) 90
実施例３
七面鳥の初生雛10羽の肛門に下記に示す試料を
１羽当り１滴（スポロゾイトとして１万個）をた
らした〔本発明、比較例１，２，３および４〕。
またオーシストを初生雛10羽に経口接種した〔比
較例５〕。これらの七面鳥に21日令において１羽
当り20万個のアイメリア・メレアグリミテイスを
主体としてアイメリア・アデノイデスおよびアイ
メリア・ガルパボニスの成熟オーシストを含くむ
計20万個を経口投与して攻撃した。対照は試料を
接種せずに攻撃のみを行つた。感染７日目に十二
指腸病変、血便の有無および斃死率について観察
した。結果は表３に示す。なお評価は以下の方法
に従つて行つた。
試料及び接種方法
本発明：アイメリア・メレアグリミテイスを主
体としてアイメリア・アデノイデスおよびアイメ
リア・ガルパボニスのスポロゾイトを含む計
330000個をPBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめた
もの。
比較例(1)：アイメリア・メレアグリミテイスを主
体としてアイメリア・アデノイデスおよびアイメ
リア・ガルパボニスのスポロシストを含む計
165000個（スポロゾイトとして330000個）を
PBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
比較例(2)：アイメリア・メレアグリミテイスを主
体としてアイメリア・アデノイデスおよびアイメ
リア・ガルパボニスのオーシストを含む41250個
（スポロゾイトとして330000個）をPBS（−）溶
液１ml中に懸濁せしめたもの。
比較例(3)：本発明の試料を60℃において30分間加
熱したもの。
比較例(4)：アイメリア・メレアグリミテイスを主
体としてアイメリア・アデノイデスおよびアイメ
リア・ガルパボニスのスポロゾイトを含む330000
個を10％ホルマリン溶液に入れ30分間放置し、次
いでこの溶液を遠心分離し、沈澱をPBS（−）溶
液１ml中に懸濁せしめたもの。
比較例(5)：アイメリア・メレアグリミテイスを主
体としてアイメリア・アデノイデスおよびアイメ
リア・ガルパボニスのオーシストを含む41250個
（スポロゾイトとして33000個）をPBS（−）溶液
１ml中に懸濁せしめたものを１羽当り１滴（約
0.03ml）経口接種する。
試料に用いたオーシスト、スポロシストおよび
スポロゾイトの調製法は実施例１に準じて行なつ
た。ただし実施例１における鶏の代わりに七面鳥
を用い、アイメリア・テネラの代わりにアイメリ
ア・メレアグリミテイス、アイメリア・アデノイ
デスおよびアイメリア・ガルパボニスを用い、オ
ーシストの集収部位を小腸管壁と小腸内容物と
し、鶏胆汁の代わりに七面鳥胆汁を用い、そして
消化時間を約１時間とした。
評価方法
十二指腸病変：十二指腸の出血の程度および炎症
の強さの程度を下記の尺度により示す。
：重度
：中等度
＋：軽度
⊥：極軽度
−：なし
血便：程度は十二指腸病変に準ずる。[Table] Example 2 One drop (10,000 sporozoites) of the sample of Eimeria necatorix shown below was added to the anus of 10 first-generation chickens (same breed as used in Example 1) per bird. [Invention, Comparative Example 1,
2, 3 and 4]. Alternatively, oocysts were orally inoculated to day-old chicks [Comparative Example (5)]. The chickens were then infected with coccidiosis by orally administering 50,000 mature oocysts of Eimeria necathrix per chicken at 21 days of age.
On the 6th day after infection, small intestinal lesion bleeding and mortality rate were observed. Sample and inoculation method The present invention: 330,000 Eimeria necatorix sporozoites suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative example (1): 165,000 sporocysts of Eimeria necathrix (330,000 sporozoites)
was suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative example (2): 41,250 oocysts (330,000 sporozoites) of Eimeria necatrix
Suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative example (3): A sample of the present invention was heated at 60°C for 30 minutes. Comparative example (4): 330,000 sporozoites of Eimeria necatrix were placed in a 10% formalin solution and left for 30 minutes, then this solution was centrifuged to remove the precipitate.
Suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative Example (5): 1250 Eimeria necatorix oocysts are orally inoculated per chicken. The preparation method for the oocysts, sporocysts, and sporozoites used in the samples was as described in Example 1.
The same procedure was followed except that Eimeria necatrice was substituted for Eimeria necatrice and the digestion time was changed to 1 hour. The above results are shown in Table 2 below. The evaluation of small intestinal lesion bleeding in Table 2 was carried out in accordance with the evaluation of lower intestinal lesion catarrhal exudate in Example 1. Table 2 Small intestinal lesion bleeding Mortality rate (%) Invention - 0 Comparative example (1) 80 Comparative example (2) 90 Comparative example (3) 80 Comparative example (4) 30 Comparative example (5) 90 Example 3 First stage of turkey One drop (10,000 sporozoites) of the following sample per bird was placed in the anus of 10 chicks [present invention, comparative examples 1, 2, 3, and 4].
In addition, oocysts were orally inoculated to 10 day-old chicks [Comparative Example 5]. These turkeys were challenged by oral administration at 21 days of age with a total of 200,000 Eimeria meleagrimiteis per bird, including mature oocysts of Eimeria adenoides and Eimeria galpabonis. As a control, only the challenge was performed without inoculating the sample. On the 7th day of infection, the animals were observed for duodenal lesions, presence of bloody stool, and mortality rate. The results are shown in Table 3. The evaluation was performed according to the following method. Sample and inoculation method The present invention: A sample containing Eimeria adenoides and Eimeria galpavonis sporozoites, mainly Eimeria meleagrimiteis.
330,000 pieces suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative example (1): A total of Eimeria meleagrimiteis as the main component, including Eimeria adenoides and Eimeria galpabonis sporocysts.
165,000 pieces (330,000 pieces as sporozoites)
Suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative Example (2): 41,250 sporozoites (330,000 sporozoites) mainly consisting of Eimeria meleagrimiteis and containing oocysts of Eimeria adenoides and Eimeria galpabonis were suspended in 1 ml of PBS (-) solution. Comparative example (3): A sample of the present invention was heated at 60°C for 30 minutes. Comparative example (4): 330,000 mainly consisting of Eimeria meleagrimiteis and including sporozoites of Eimeria adenoides and Eimeria garpabonis
The pellets were placed in a 10% formalin solution and allowed to stand for 30 minutes, then this solution was centrifuged, and the precipitate was suspended in 1 ml of PBS (-) solution. Comparative example (5): 41,250 sporozoites (33,000 sporozoites) mainly composed of Eimeria meleagrimiteis and containing oocysts of Eimeria adenoides and Eimeria galpabonis were suspended in 1 ml of PBS (-) solution. 1 drop per wing (approx.
0.03ml) orally. Oocysts, sporocysts, and sporozoites used as samples were prepared in accordance with Example 1. However, turkey was used instead of chicken in Example 1, Eimeria meleagrimiteis, Eimeria adenoides and Eimeria galpabonis were used instead of Eimeria tenella, and the oocyst collection site was the small intestinal wall and the contents of the small intestine. Turkey bile was used in place of chicken bile, and the digestion time was about 1 hour. Evaluation method Duodenal lesions: The degree of bleeding in the duodenum and the intensity of inflammation are indicated using the following scale. : Severe : Moderate + : Mild ⊥ : Very mild - : None Bloody stool: The severity is similar to that of duodenal lesions.
【表】
実施例４
うずらの初生雛10羽の肛門に下記に示す試料を
１羽当り１滴（スポロゾイトとして１万個）をた
らした〔本発明１、比較例１，２，３および４〕。
またオーシストを初生雛10羽に経口接種した〔比
較例５〕。
試料及び接種方法
本発明：アイメリア・ツノダイのスポロゾイト
330000個をPBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめた
もの。
比較例(1)：アイメリア・ツノダイのスポロシスト
165000個（スポロゾイトとして330000個）を
PBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
比較例(2)：アイメリア・ツノダイのオーシスト
41250個（スポロゾイトとして330000個）をPBS
（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
比較例(3)：本発明の試料を60℃において30分間加
熱したもの。
比較例(4)：アイメリア・ツノダイのスポロゾイト
330000個を10％ホルマリン溶液に入れ30分間放置
し、次いでこの溶液を遠心分離し、沈澱をPBS
（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
試料に用いたオーシスト、スポロシストおよび
スポロゾイトの調製法は実施例１に準じて行つ
た。ただし実施例１における鶏の代わりにうずら
を用いアイメリア・ブルネツテイの代わりにアイ
メリア・ツノダイを用い、そして鶏胆汁の代わり
にうずら胆汁を用いた。
上記の結果を下記の表４に示す。表４中の盲腸
病変出血の評価は実施例１における腸下部病変カ
タール性浸出物の評価程度に準じて行つた。
表 ４
盲腸病変出血 斃死率（％）
本発明 − ０
比較例(1) 90
比較例(2) 90
比較例(3) 80
比較例(4) ＋ 30
比較例(5) 90[Table] Example 4 One drop of the sample shown below (10,000 sporozoites) per bird was placed in the anus of 10 first-born quail chicks [Invention 1, Comparative Examples 1, 2, 3, and 4] .
In addition, oocysts were orally inoculated to 10 day-old chicks [Comparative Example 5]. Sample and inoculation method The present invention: Sporozoites of Eimeria hornfish
330,000 pieces suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative example (1): Eimeria hornfish sporocyst
165,000 pieces (330,000 pieces as sporozoites)
Suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Comparative example (2): Eimeria hornfish oocyst
41,250 pieces (330,000 pieces as sporozoites) in PBS
(-) Suspended in 1 ml of solution. Comparative example (3): A sample of the present invention was heated at 60°C for 30 minutes. Comparative example (4): Eimeria hornfish sporozoite
330,000 pieces were placed in a 10% formalin solution and left for 30 minutes, then this solution was centrifuged and the precipitate was placed in PBS.
(-) Suspended in 1 ml of solution. Oocysts, sporocysts, and sporozoites used as samples were prepared in accordance with Example 1. However, in Example 1, quail was used instead of chicken, Eimeria brunettii was used instead of Eimeria brunettii, and quail bile was used instead of chicken bile. The above results are shown in Table 4 below. The evaluation of cecal lesion bleeding in Table 4 was carried out in accordance with the evaluation of lower intestinal lesion catalytic exudate in Example 1. Table 4 Cecal lesion bleeding Mortality rate (%) Invention - 0 Comparative example (1) 90 Comparative example (2) 90 Comparative example (3) 80 Comparative example (4) + 30 Comparative example (5) 90