【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
［産業上の利用分野］
本発明は家禽類の抗コクシジウム症を免疫的に
予防し得る抗コクシジウム剤および該抗コクシジ
ウム剤の接種方法に関する。
［従来の技術］
家禽類、すなわち鶏、七面鳥、うずら、ほろほ
ろ鳥などのコクシジウム症はある種の寄生性原虫
の感染により起きる伝染病で世界各国に広く分布
している。コクシジウム症は例えば鶏ではアイメ
リア・テネラ（Eimeria tenella）、アイイメリ
ア・アセルブリナ（E.acervulina）、アイメリ
ア・ネカトリツクス（E.necatrix）、アイメリ
ア・ブルネツテイ（E.brunetti）、アイメリア・
マキシマ（E.maxima）などにより、七面鳥では
アイメリア・メレアグリミテイス（E.
meleagrimitis）、アイメリア・アデノイデス（E.
adenoides）、アイメリア・ガロパボニス（E.
gallopovonis）などにより、うずらではアイメリ
ア・ウズラ（E.uzura）、アイメリア・ツノダイ
（E.tsunodai）などにより、そしてほろほろ鳥で
はアイメリア・グレニエリ（E.grenieri）、アイ
メリア・ヌミダエ（E.numidae）などによりひき
おこされることが知られている。これに感染した
動物は下痢、血便等の症状を呈し、治療が遅れた
場合または症状が重い場合は斃死することも多
く、そして斃死に至らなくても発育が阻害され
る。そのためにコクシジウム症は家禽飼育業者に
とつては最も被害の大きい疾病の一つとされてき
た。
従来、かかるコクシジウム症の予防としてワク
チンを含めて薬剤の経口投与が行われている。コ
クシジウム症のワクチン（主に鶏について行われ
ている）はコクシジウム症を起こしやすい数種類
のオーシストの混合液であり、このものを家禽に
経口投与するものである。しかしながら、こうし
た薬剤の投与による予防法には、薬剤の耐性獲得
による効果の減退等の問題があり、またワクチン
による予防法は投与量によつては副作用が発現す
る可能性があつた。
［発明の内容］
本発明者らは前記問題を解決すべく研究を行つ
てきた。その結果、家禽類のコクシジウム原虫の
発育環の一つであるスポロゾイトのホルマリン処
理物が有効であること、しかもそれを家禽類の総
排泄腔に接種するとより予防効果が高いことを見
出した。 したがつて、本発明は、ホルマリン処
理した家禽類のコクシジウム原虫のスポロゾイト
を活性成分とする抗コクシジウム剤である。
更に、本発明は、該ホルマリン処理したスポロ
ゾイトを活性成分とする抗コクシジウム剤を家禽
類の総排泄腔に接種することを特徴とする家禽類
のコクシジウム症の予防法を包含する。
コクシジウム原虫のスポロゾイトはコクシジウ
ム原虫の発育環の一形態であり、本発明の抗コク
シジウム剤はかかるスポロゾイトをホルマリンで
処理したものを活性成分としている。
ワクチン等の製造時には、病原性微生物の活性
を弱めたり、不活化することを目的としてホルマ
リンによる処理が広く行われているが、本発明に
おけるスポロゾイトのホルマリン処理も上記のよ
うな病原性微生物のホルマリン処理で一般に採用
されているのと同様の条件下で行うことができ、
通常、濃度約0.05〜15％のホルマリン水溶液を用
いて、約０〜40℃の温度で処理するのがよい。処
理時間は、ホルマリン溶液の濃度や処理温度によ
り異なつてくるが、通常約15分間〜７日行うのが
よい。この場合に、ホルマリン処理されるスポロ
ゾイトは、場合によりスポロシスト、オーシスト
またはそれらの皮膜を含んでいてもよい。
以下に、スポロゾイトのホルマリン処理物の調
製法の例を示す。
コクシジウム症に感染した家禽類の糞、腸管壁
および腸管内容物から分離したコクシジウム原虫
の成熟オーシストの皮膜を磨砕してスポロシスト
を得る。次いでこのスポロシストに家禽類の胆汁
およびトリプシンを作用させて主としてスポロゾ
イトを含む生成物を得る。この生成物を直接また
はそこからスポロゾイトを単離し、それをホルマ
リン水溶液中に入れて一定時間放置した後、遠心
分離を行つて沈澱物をホルマリン処理したスポロ
ゾイトとして回収する。
上記のようにして調製したホルマリン処理した
スポロゾイトは、水、生理食塩水、緩衝液等に懸
濁した懸濁液の形態で接種しても、または固形状
に加工して接種してもよい。懸濁液の場合は付着
性や粘稠性を与えるような加工を行つてもよい。
本発明の抗コクシジウム剤の接種部位としては
口腔、筋肉および総排泄腔が挙げられるが、特に
総排泄腔に接種するのが好ましい。総排泄腔接種
の具体的な方法としては、家禽類の肛門にたらす
か、注入、挿入、スプレー等の方法が挙げられ
る。ホルマリン処理したスポロゾイトの接種量は
１羽当り約500個以上がよい。
本発明の抗コクシジウム剤を用いると副作用を
起こすことな家禽類のコクシジウム症を有効に防
止することができ、またコクシジウム症に感染し
た場合にはその症状を軽くすることができる。ま
た本発明の抗コクシジウム剤は他の家禽類の予防
及び治療剤、例えばニユーカツスル病ワクチン、
伝染性コリーザ治療剤等と併用または同時適用し
てもよい。更にコクシジウム症感染防止効果も例
えば初生雛に本発明の抗コクシジウム剤を接種し
た場合、75週以上の長期に亘つて有効である。
次に実施例により本発明を具体的に説明する
が、それにより限定されない。
実施例 １
鶏の初生雛（ブロイラー専用種ハバード）10羽
の肛門に下記に示す各試料を１羽当り１滴（ホル
マリン処理したスポロゾイトとして１万個）たら
す。次いでこの鶏に21曰令において１羽当り20万
個のアイメリア・テネラの成熟オーシストを経口
投与してコクシジウム症に感染させる。比較例は
試料を接種せずに感染のみを行つたものである。
また、対照はアイメリア・テネラのオーシストを
初生雛（ブロイラー専用種ハバード）10羽の肛門
に下記の試料（対照試料）を１羽当り１滴たら
し、21日令において１羽当り20万個のアイメリ
ア・テネラの成熟オーシストを経口投与してコク
シジウム症に感染させたものである。感染後８日
後に盲腸病変、糞中のオーシスト数、血便の有無
および斃死率について観察した。結果は表１に示
すとおりであつた。なお、評価は後記の方法にし
たがつて行つた。
本発明試料：アイメリア・テネラのスポロゾイト
330000個を10％ホルマリン水溶液に入れて４℃
で30分間放置し、次いでこの溶液を遠心分離し
て沈澱をPBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめた
もの。
対照試料：アイメリア・テネラのオーシスト
41250個（スポロゾイトとして330000個）を
PBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
試料に用いたオーシストおよびホルマリン処理
する前のスポロゾイトの調製は、「J.Protozool.」
第９巻(2)154〜161頁（1962）に記載されている方
法に基づいて以下のように行つた。
アイメリア・テネラの成熟オーシストを経口投
与した鶏の糞、盲腸壁および盲腸内容物を集め、
３％重クロム酸ガリウム溶液に浮遊せしめ、そし
て28℃において２日間培養した。得られた成熟オ
ーシストを含む溶液を遠心分離（3000rpm、10分
間）し、そして沈澱を集める。次にこの沈澱を水
で洗浄し且つ飽和食塩水を添加する。この溶液を
遠心分離（3000rpm、10分間）し、上澄みを採
り、この上澄みを水で希釈し、希釈液を更に遠心
分離（1000rpm、３分間）し、そして沈澱を集め
る。この沈澱はほとんどオーシストのみよりなる
［対照試料で使用］。前記オーシストに水および５
％次亜塩素酸ナトリウム液を加え且つ15分間放置
した後、遠心分離（2000rpm、３分間）を行う。
得られた沈澱を水で洗浄し、次いでホモジナイザ
ーで磨砕する。この摩砕物はほとんどスポロシス
トよりなる。このスポロシストに５％鶏胆汁およ
び0.25％トリプシンPBS（−）溶液を加え、そし
て40℃の温浴中でおよそ1.5時間消化せしめる。
得られた消化液を遠心分離して沈澱を集め、そし
てこの沈澱をPBS（−）溶液で洗浄する。このも
のはほとんどスポロゾイトよりなる（本発明試料
はこのようにして得られたスポロゾイトを上記に
よりホルマリン処理したものである）。
上記の結果を下記の表１に示す。
［評価方法］
盲腸病変
盲腸の萎縮および出血の程度および炎症滲出物
の量の程度を次の尺度により示す。
：重度
：中程度
＋：軽度
⊥：極軽度
−：なし
血 液
程度は盲腸病変に準ずる。
糞中のオーシスト数
糞１ｇ中のオーシストの数を表す。
[Industrial Application Field] The present invention relates to an anticoccidial agent capable of immunologically preventing anticoccidial disease in poultry, and a method for inoculating the anti-coccidial agent. [Prior Art] Coccidiosis of poultry, ie, chickens, turkeys, quail, guinea fowl, etc., is an infectious disease caused by infection with a certain type of parasitic protozoa, and is widely distributed throughout the world. For example, in chickens, coccidiosis is caused by Eimeria tenella, E. acervulina, E. necatrix, E. brunetti, Eimeria
maxima (E.maxima), and Eimeria meleagrimiteis (E. maxima) in turkeys.
meleagrimitis), Eimeria adenoides (E.
adenoides), Eimeria galopabonis (E.
quail by E.uzura, E.tsunodai, etc., and guinea fowl by E.grenieri, E.numidae, etc. It is known to occur. Animals infected with this disease exhibit symptoms such as diarrhea and bloody stools, and if treatment is delayed or the symptoms are severe, they often die, and even if they do not die, their growth is stunted. For this reason, coccidiosis has been considered one of the most damaging diseases for poultry farmers. Conventionally, drugs including vaccines have been orally administered to prevent coccidiosis. Coccidiosis vaccines (mainly used in chickens) are a mixture of several types of oocysts that are susceptible to coccidiosis, and are administered orally to poultry. However, these methods of prophylaxis by administering drugs have problems such as decreased effectiveness due to the acquisition of drug resistance, and prophylaxis using vaccines may cause side effects depending on the dose administered. [Contents of the Invention] The present inventors have conducted research to solve the above problem. As a result, they found that a formalin-treated product of sporozoites, which is one of the growth cycles of coccidia protozoa in poultry, is effective, and that inoculation into the cloaca of poultry has a higher preventive effect. Therefore, the present invention is an anti-coccidial agent containing formalin-treated sporozoites of poultry coccidia protozoa as an active ingredient. Furthermore, the present invention includes a method for preventing coccidiosis in poultry, which comprises inoculating the cloaca of the poultry with an anti-coccidial agent containing the formalin-treated sporozoites as an active ingredient. Sporozoites of coccidia protozoa are one form of the growth cycle of coccidia protozoa, and the anti-coccidial agent of the present invention contains such sporozoites treated with formalin as an active ingredient. During the production of vaccines, etc., treatment with formalin is widely used for the purpose of weakening or inactivating the activity of pathogenic microorganisms. can be carried out under conditions similar to those commonly employed in processing;
Usually, the treatment is preferably carried out using an aqueous formalin solution having a concentration of about 0.05 to 15% at a temperature of about 0 to 40°C. The treatment time varies depending on the concentration of the formalin solution and the treatment temperature, but it is generally recommended to carry out the treatment for about 15 minutes to 7 days. In this case, the sporozoites treated with formalin may optionally contain sporocysts, oocysts, or their coatings. An example of a method for preparing a formalin-treated sporozoite is shown below. Sporocysts are obtained by grinding the membranes of mature oocysts of coccidian protozoa isolated from the feces, intestinal wall, and intestinal contents of poultry infected with coccidiosis. The sporocysts are then treated with poultry bile and trypsin to obtain a product containing primarily sporozoites. Sporozoites are isolated directly from this product or sporozoites are placed in an aqueous formalin solution and allowed to stand for a certain period of time, followed by centrifugation and the precipitate is recovered as formalin-treated sporozoites. The formalin-treated sporozoites prepared as described above may be inoculated in the form of a suspension in water, physiological saline, a buffer solution, etc., or may be processed into a solid form and inoculated. In the case of a suspension, it may be processed to give it adhesiveness or viscosity. Inoculation sites for the anticoccidial agent of the present invention include the oral cavity, muscles, and cloaca, and it is particularly preferable to inoculate the cloaca. Specific methods for cloacal inoculation include dropping into the anus of poultry, injection, insertion, and spraying. The amount of inoculation of formalin-treated sporozoites is preferably about 500 or more per bird. By using the anti-coccidiosis agent of the present invention, coccidiosis in poultry that causes side effects can be effectively prevented, and the symptoms of coccidiosis can be alleviated when infected with coccidiosis. The anticoccidial agent of the present invention may also be used as a preventive or therapeutic agent for other poultry animals, such as Newcatus disease vaccine,
It may be used in combination or simultaneously with infectious coryza therapeutic agents. Furthermore, the effect of preventing coccidiosis infection is effective for a long period of 75 weeks or more, for example, when day-old chicks are inoculated with the anti-coccidiosis agent of the present invention. Next, the present invention will be specifically explained with reference to Examples, but the present invention is not limited thereto. Example 1 One drop of each of the following samples (10,000 sporozoites treated with formalin) per bird was placed in the anus of 10 first-born chicken chicks (broiler-only Hubbard). The chickens are then infected with coccidiosis by orally administering 200,000 mature oocysts of Eimeria tenella per chicken at 21 days old. In the comparative example, only infection was performed without inoculating the sample.
In addition, as a control, one drop of the following sample (control sample) was applied to the anus of 10 first-born chicks (broiler-only Hubbard), and 200,000 oocysts per bird were obtained at 21 days of age. Coccidiosis was infected by orally administering mature oocysts of Eimeria tenella. Eight days after infection, the rats were observed for cecal lesions, the number of oocysts in the feces, the presence or absence of bloody stool, and the mortality rate. The results were as shown in Table 1. Note that the evaluation was performed according to the method described below. Invention sample: Eimeria tenella sporozoites
330,000 pieces were placed in a 10% formalin aqueous solution at 4°C.
This solution was then centrifuged and the precipitate was suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Control sample: Eimeria tenella oocysts
41,250 pieces (330,000 pieces as sporozoites)
Suspended in 1 ml of PBS(-) solution. The preparation of oocysts used as samples and sporozoites before formalin treatment is described in "J. Protozool."
The following procedure was carried out based on the method described in Vol. 9 (2), pp. 154-161 (1962). The feces, cecal wall, and cecal contents of chickens to which mature oocysts of Eimeria tenella were orally administered were collected;
The cells were suspended in a 3% gallium dichromate solution and cultured at 28°C for 2 days. The resulting solution containing mature oocysts is centrifuged (3000 rpm, 10 minutes) and the precipitate is collected. The precipitate is then washed with water and saturated brine is added. The solution is centrifuged (3000 rpm, 10 minutes), the supernatant is collected, the supernatant is diluted with water, the diluted solution is further centrifuged (1000 rpm, 3 minutes), and the precipitate is collected. This precipitate consists almost exclusively of oocysts [used in the control sample]. the oocysts with water and 5
% sodium hypochlorite solution and left to stand for 15 minutes, centrifugation (2000 rpm, 3 minutes) is performed.
The precipitate obtained is washed with water and then ground in a homogenizer. This ground material consists mostly of sporocysts. A 5% chicken bile and 0.25% trypsin PBS (-) solution is added to the sporocysts and digested in a 40°C bath for approximately 1.5 hours.
The obtained digestive fluid is centrifuged to collect a precipitate, and this precipitate is washed with a PBS(-) solution. This substance consists almost entirely of sporozoites (the sample of the present invention is a sporozoite obtained in this manner and treated with formalin as described above). The above results are shown in Table 1 below. [Evaluation method] Cecal lesions The degree of atrophy and bleeding in the cecum and the amount of inflammatory exudate are indicated using the following scale. : Severe: Moderate +: Mild ⊥: Very mild -: None Blood The severity is similar to that of cecal lesions. Number of oocysts in feces Represents the number of oocysts in 1 g of feces.
【表】
実施例 ２
鶏の初生雛（実施例１で用いたのと同じ鶏種）
10羽の肛門に下記に示すアイメリア・ブルネツテ
イの試料を１羽当り１滴（ホルマリン処理したス
ポロゾイトとして１万個）たらす。次いでこの鶏
に21日令において１羽当り20万個のアイメリア・
ブルネツテイの成熟オーシストを経口投与してコ
クシジウム症に感染させる。比較例は試料を接種
せずに感染のみを行つたものである。また、対照
はアイメリア・ブルネツテイのオーシストを初生
雛（実施例１で用いたのと同じ鶏種）10羽の肛門
に下記の試料（対照試料）を１羽当り１滴たら
し、21日令において１羽当り20万個のアイメリ
ア・ブルネツテイの成熟オーシストを経口投与し
てコクシジウム症に感染させたものである。感染
後７日目に腸下部病変カタール性滲出物について
観察し、さらに糞中のオーシストの数を数えた。
結果は表２に示すとおりであつた。なお、腸下部
病変カタール性滲出物程度は実施例１における盲
腸病変に準じて評価し、糞中のオーシスト数は実
施例１と同様にして数えた。
本発明試料：アイメリア・ブルネツテイのスポロ
ゾイト330000個を10％ホルマリン水溶液に入れ
て４℃で30分間放置し、次いでこの溶液を遠心
分離して沈澱をPBS（−）溶液１ml中に懸濁せ
しめたもの。
対照試料：アイメリア・ブルネツテイのオーシス
ト41250個（スポロゾイトとして330000個）を
PBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。[Table] Example 2 First-born chicken chicks (same breed of chicken used in Example 1)
One drop (10,000 formalin-treated sporozoites) of the Eimeria brunetsutei sample shown below per bird was placed in the anus of 10 birds. The chickens were then given 200,000 Eimeria per bird at 21 days of age.
Coccidiosis is infected by orally administering mature oocysts of C. brunetsutei. In the comparative example, only infection was performed without inoculating the sample. In addition, as a control, one drop of the following sample (control sample) was applied to the anus of 10 day-old chicks (same chicken breed as used in Example 1) with Eimeria brunetsutei oocysts. Each bird was infected with coccidiosis by orally administering 200,000 mature oocysts of Eimeria brunetsutei. Seven days after infection, the lower intestinal lesions were observed for catarrhal exudate, and the number of oocysts in the feces was counted.
The results were as shown in Table 2. The degree of catarrhal exudate in the lower intestinal lesions was evaluated according to the cecal lesions in Example 1, and the number of oocysts in the feces was counted in the same manner as in Example 1. Sample of the present invention: 330,000 sporozoites of Eimeria brunetsutei were placed in a 10% formalin aqueous solution and left at 4°C for 30 minutes, then this solution was centrifuged and the precipitate was suspended in 1 ml of PBS (-) solution. . Control sample: 41,250 oocysts (330,000 sporozoites) of Eimeria brunetsutei
Suspended in 1 ml of PBS(-) solution.
【表】
実施例 ３
鶏の初生雛（実施例１で用いたのと同じ雛種）
10羽の肛門に下記に示すアイメリア・ネカトリツ
クスの試料を１羽当り１滴（ホルマリン処理した
スポロゾイトとして１万個）たらす。次いでこの
鶏に21日令において１羽当り20万個のアイメリ
ア・ネカトリツクスの成熟オーシストを経口投与
してコクシジウム症に感染させる。比較例は試料
を接種せずに感染のみを行つたものである。ま
た、対照はアイメリア・ネカトリツクスのオーシ
ストを初生雛（実施例１で用いたのと同じ鶏種）
10羽の肛門に下記の試料（対照試料）を１羽当り
１滴たらし、21日令において１羽当り20万個のア
イメリア・ブルネツテイの成熟オーシストを経口
投与してコクシジウム症に感染させたものであ
る。感染後６日目に小腸病変出血について観察
し、さらに斃死率を求めた。結果は表３に示すと
おりであつた。なお、小腸病変出血の程度は実施
例１における盲腸病変に準じて評価した。
本発明試料：アイメリア・ネカトリツクスのスポ
ロゾイト330000個を10％ホルマリン水溶液に入
れて25℃で30分間放置し、次いでこの溶液を遠
心分離して沈澱をPBS（−）溶液１ml中に懸濁
せしめたもの。
対照試料：アイメリア・ネカトリツクスのオーシ
スト41250個（スポロゾイトとして330000個）
をPBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
［表３］
小腸病変出血 斃死率(%)
比較例 90
本発明 ＋ 30
対照例 90
実施例 ４
うずらの初生雛10羽の肛門に下記に示す試料を
１羽当り１滴（ホルマリン処理したスポロゾイト
として１万個）たらす。次いでこれらのうずらに
21日令において１羽当り20万個のアイメリア・ツ
ノダイの成熟オーシストを経口投与してコクシジ
ウム症に感染させた。比較例は試料を接種せずに
感染のみを行つたものである。また、対照はアイ
メリア・ツノダイのオーシストをうずらの初生雛
10羽の肛門に下記の試料（対照試料）を１羽当り
１滴たらし、21日令において１羽当り20万個のア
イメリア・ブルネツテイの成熟オーシストを経口
投与してコクシジウム症に感染させたものであ
る。感染後７日目に盲腸病変出血および斃死率に
ついて観察した。結果は表４に示すとおりであつ
た。なお、評価の程度は実施例１における盲腸病
変に準じて行つた。
本発明試料：アイメリア・ツノダイのスポロゾイ
ト330000個を10％ホルマリン水溶液に入れて15
℃で30分間放置し、次いでこの溶液を遠心分離
して沈澱をPBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめ
たもの。
対照試料：アイメリア・ツノダイのオーシスト
41250個（スポロゾイトとして330000個）を
PBS（−）溶液１ml中に懸濁せしめたもの。
［表４］
盲腸病変出血 斃死率（％）
比較例 90
本発明 ＋ 30
対照例 90[Table] Example 3 First-born chicken chicks (same chick type used in Example 1)
One drop (10,000 formalin-treated sporozoites) of the Eimeria necatorix sample shown below per bird was placed in the anus of 10 birds. The chickens are then infected with coccidiosis by orally administering 200,000 mature oocysts of Eimeria necatricex per chicken at 21 days of age. In the comparative example, only infection was performed without inoculating the sample. In addition, as a control, oocysts of Eimeria necathrix were used in day-old chicks (same chicken breed as used in Example 1).
One drop of the following sample (control sample) per bird was placed in the anus of 10 birds, and 200,000 mature oocysts of Eimeria brunetsutii were orally administered to each bird at 21 days of age to infect them with coccidiosis. It is. On the 6th day after infection, small intestinal lesions were observed for bleeding, and the mortality rate was determined. The results were as shown in Table 3. In addition, the degree of small intestinal lesion bleeding was evaluated according to the cecal lesion in Example 1. Sample of the present invention: 330,000 sporozoites of Eimeria necatrix were placed in a 10% formalin aqueous solution and left at 25°C for 30 minutes, then this solution was centrifuged and the precipitate was suspended in 1 ml of PBS (-) solution. . Control sample: 41,250 Eimeria necatrichus oocysts (330,000 sporozoites)
was suspended in 1 ml of PBS(-) solution. [Table 3] Small intestinal lesion bleeding mortality rate (%) Comparative example 90 Present invention + 30 Control example 90 Example 4 One drop of the following sample per bird was placed in the anus of 10 day-old quail chicks (as sporozoites treated with formalin). 10,000 pieces). Then these quail
At 21 days of age, each bird was infected with coccidiosis by orally administering 200,000 mature oocysts of Eimeria hornfish. In the comparative example, only infection was performed without inoculating the sample. In addition, as a control, oocysts of Eimeria hornfish were used as a control sample for first-year quail chicks.
One drop of the following sample (control sample) per bird was placed in the anus of 10 birds, and 200,000 mature oocysts of Eimeria brunetsutii were orally administered to each bird at 21 days of age to infect them with coccidiosis. It is. Cecal lesion bleeding and mortality rate were observed on day 7 after infection. The results were as shown in Table 4. In addition, the degree of evaluation was performed according to the cecal lesion in Example 1. Sample of the present invention: 330,000 Eimeria hornfish sporozoites were placed in a 10% formalin aqueous solution for 15 minutes.
The solution was allowed to stand at ℃ for 30 minutes, then centrifuged, and the precipitate was suspended in 1 ml of PBS(-) solution. Control sample: Eimeria hornfish oocysts
41,250 pieces (330,000 pieces as sporozoites)
Suspended in 1 ml of PBS(-) solution. [Table 4] Cecal lesion bleeding mortality rate (%) Comparative example 90 Invention + 30 Control example 90