JPH0324452B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 （技術分野） 本発明は、新規な腸管吸収性ウロキナーゼリポ
ソーム組成物、さらに詳しくは、高級脂肪酸添加
ウロキナーゼリポソームと、高級脂肪酸、ポリア
ルキレングリコールおよびカルシウムなどの吸収
促進剤を含有する腸管吸収性ウロキナーゼリポソ
ーム組成物に関するものである。

ウロキナーゼはフイブリンおよび血栓の溶解酵
素であり、臨床上、血栓溶解剤として脳血管閉
塞、心筋梗塞、肺栓塞等、各種の血栓症の治療に
使用されており、また、制ガン剤との併用治療に
も用いられている。

（先行技術および問題点） 薬剤の投与経路は一般に注射、経口、外用等に
大別されるが、特殊な場合を除き、患者、医師等
の関係者の煩雑さ、苦痛等の負担を考えると、経
口投与により注射投与と同等の効果が得られるな
らば、経口投与がより有用である。

ウロキナーゼは経口投与すると胃でプロテアー
ゼ、酸などにより分解失活され、腸管からの吸収
が悪いため、従来は静脈内、皮下、筋肉内注射ま
たは静脈内点滴注射により投与されている。これ
らの投与方法によれば、ウロキナーゼを分解失活
することなく投与することができるが、投与の度
に医師の手を煩わせなければならず、また患者に
苦痛を与える欠点がある。

さらにウロキナーゼは血中半減期がわずか約15
分と短いため、上記従来の投与方法でウロキナー
ゼの血中濃度を一定の水準に保つことは困難であ
り、薬効の持続性に欠けていた。

発明の目的 本発明は、腸管からの吸収性が優れた腸管吸収
性ウロキナーゼリポソーム組成物を提供すること
を目的とする。

さらに本発明は、吸収が徐々に行われ、薬効が
持続する腸管吸収性ウロキナーゼリポソーム組成
物を提供することを目的とする。

発明の具体的構成 本発明は、ウロキナーゼを取り込んだリポソー
ムおよび吸収促進剤からなり、該リポソームを構
成する膜材は脂質および少なくとも１種の高級脂
肪酸を含有し、かつ、膜材中の高級脂肪酸配合量
は５〜15wt％であることを特徴とする腸管吸収
性ウロキナーゼリポソーム組成物を提供するもの
である。

吸収促進剤はポリアルキレングリコール、カル
シウムおよび高級脂肪酸が好ましい。また、脂質
は水素添加リン脂質が好ましい。

以下に本発明をさらに詳細に説明する。

ウロキナーゼは、前述したように経口投与した
場合には胃で分解失活され、また腸溶剤等の手段
により胃でのプロテアーゼ、酸などによる分解失
活を防いだとしても、腸管からの吸収効率が悪
い。

そこで、本発明者等は鋭意研究した結果、高級
脂肪酸添加ウロキナーゼリポソームに、高級脂肪
酸、ポリアルキレングリコール、カルシウムなど
の吸収促進剤を配合すると、意外にも経口投与に
よつて腸管からウロキナーゼが効率良く吸収さ
れ、しかも長時間にわたつて高い血中濃度を示す
ことを知り、本発明を完成した。

従つて本発明は、その膜材が脂質および所定量
の高級脂肪酸を含有するウロキナーゼを取り込ん
だリポソームと、高級脂肪酸、ポリアルキレング
リコールおよびカルシウムから適宜選択された吸
収促進剤とを含有する腸管吸収性ウロキナーゼ組
成物を提供する。

本発明において使用されるウロキナーゼは、医
薬として投与可能なものである限り何ら限定され
ない。通常分子量25000〜60000の人由来のウロキ
ナーゼが使用される。

本発明のウロキナーゼを取り込んだリポソーム
に用いる膜材としては、リポソームを作製するの
に適当な脂質および所定量の高級脂肪酸が用いら
れる。脂質、特にリン脂質としては大豆レシチ
ン、卵黄レシチン等の天然リン脂質、合成リン脂
質、あるいは天然リン脂質に水素添加を行なつた
ものなど、任意のリン脂質を利用することができ
る。天然のリン脂質は全て不飽和脂肪酸を含んで
いるため、本発明の目的をより高度に達成するた
めには、上記天然リン脂質の不飽和脂肪酸を水素
で飽和した水素添加リン脂質を使用するのがより
効果的である。合成リン脂質も使用可能である
が、現在のところ非常に高価で、経済上の理由か
ら使用には不適当である。

本発明において用いるリン脂質の代表例として
は、ホスフアチジルコリン、ホスフアチジルエタ
ノールアミン、ホスフアチジルイノシトール、ホ
スフアチジルセリン、ホスフアチジルグリセロー
ル、スフインゴミエリン、カルジオリピン等を挙
げることができる。さらに、これらに常法に従い
水素添加したものが挙げられる。特に大豆レシチ
ン、卵黄レシチン、コーンレシチン、綿実油レシ
チン、ナタネレシチン等を水素添加した水素添加
天然レシチンが好適に使用される。

本発明におけるウロキナーゼリポソームの膜材
に使用する高級脂肪酸としては、炭素原子10〜20
個を有する高級脂肪酸が望ましく、その例とし
て、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パ
ルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノー
ル酸、リノレン酸、アラキドン酸等が挙げられ
る。特に１〜４個の二重結合を有する炭素原子数
18ないし20の不飽和高級脂肪酸、例えばオレイン
酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸が好
ましく、オレイン酸が最も好ましい。これらの高
級脂肪酸は単独であるいは複合して使用すること
ができ、その配合量としては5wt％以上、かつリ
ン脂質がミセルを形成しない濃度（wt％）とす
るのが良い。高級脂肪酸の配合量が5wt％以上の
場合、さらに好ましくは10wt％以上の場合、本
発明の目的とする親和性、安定性、徐放性などの
点において優れた効果を示す。リン脂質はラメラ
構造となる濃度範囲にて用いないとリポソームと
して薬物を保持することができない。高級脂肪酸
の配合量が増大すると、リン脂質が高級脂肪酸を
中心にかかえてミセルを形成してしまい、リポソ
ームを形成しなくなる。この時の高級脂肪酸の配
合量は条件に応じて変動するが、約30wt％前後
となる。従つて高級脂肪酸はこの配合量未満のと
ころで使用しないとリポソームを形成しなくなる
ため、薬物の保持効率は極端に低下または不能と
なる。本発明では、これらを考慮し、膜材中への
高級脂肪酸の配合量は、15wt％以下とした。

本発明の膜材には、膜の強度を高めるためにコ
レステロール、トコフエロール等のステロールを
添加することができ、また、生体中における薬剤
の除放性を調節するために負の電荷を与える物
質、例えばホスフアチジン酸、ジセチルホスフエ
ートを添加することができる。リポソーム膜はこ
れらの物質の存在によつて崩壊がコントロールさ
れる。

本発明の組成物に用いるウロキナーゼを取り込
んだリポソームは、それ自体公知の方法によつて
製造される。例えば、天然リン脂質、水素添加天
然リン脂質、少なくとも１種の上記高級脂肪酸お
よび所望によりステロール、負電荷を与える物質
をクロロホルム、エタノール等の適当な溶媒に溶
解し、得られた溶液から溶媒を留去してリン脂質
等で構成される膜を調製する。得られた膜をクロ
ロホルム、エーテル等の適当な溶媒に溶解し、こ
の溶液にウロキナーゼの水溶液を加え、得られた
混合液を激しく振盪し、好ましくは超音波処理を
行い、薬物水溶液を均一に分散させる。分散液か
ら溶媒を留去してウロキナーゼリポソームを得
る。かくして得られたリポソームは、必要により
生理的に許容される水溶液、例えば生理食塩水で
洗浄した後、ペレツト状、懸濁状製剤、顆粒剤、
粉末剤に調製される。

本発明における高級脂肪酸添加ウロキナーゼリ
ポソームを凍結乾燥するにあたつては、通常の条
件でよく、例えば、−20〜−80℃で凍結させ、
0.3torr以下の減圧下に氷を昇華させるのが好ま
しい。さらに、良好な凍結乾燥ケーキを形成させ
るためには、例えば、マンニトール、デキストリ
ン、グリシン等の通常用いられる賦形剤を加えて
おいても良い。

本発明の腸管吸収性ウロキナーゼリポソーム組
成物は、上記の如くして得られた高級脂肪酸添加
ウロキナーゼリポソームに加えて、吸収促進剤を
含有する。また、これらの他に適宜な添加物を含
有せしめても良い。高級脂肪酸を添加したウロキ
ナーゼリポソームは、高級脂肪酸を含有するた
め、それ自体吸収促進性を有する。しかし、これ
だけでは十分ではないので、高級脂肪酸、ポリア
ルキレングリコールおよびカルシウム等から適宜
選択される吸収促進剤を併存させ、ウロキナーゼ
リポソーム組成物とする。以下に、吸収促進剤に
ついて詳述する。

本発明における吸収促進剤の高級脂肪酸として
は、炭素原子10〜20個を有する高級脂肪酸が望ま
しく、その例として、カプリン酸、ラウリン酸、
ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ア
ラキドン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン
酸等があげられる。特に１〜４個の二重結合を有
する炭素原子数18乃至20の不飽和高級脂肪酸、例
えばオレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラ
キドン酸が好ましく、オレイン酸が最も好まし
い。

本発明における吸収促進剤のポリアルキレング
リコールの例としては、ポエチレングリコール、
ポリプロピレングリコールが挙げられる。ポリア
ルキレングリコールの重合度は５〜500が好まし
く、重合度160〜200のポリエチレングリコールが
特に好適である。

本発明における吸収促進剤のカルシウムは、医
薬製剤成分として投与可能な化合物の形態で使用
される。例えば塩化カルシウム、乳酸カルシウ
ム、リン酸カルシウムまたはグルコン酸カルシウ
ムの形態で本発明の組成物に含有せしめる。

本発明の組成物において、高級脂肪酸添加ウロ
キナーゼリポソームと、高級脂肪酸、ポリアルキ
レングリコールおよびカルシウムの中から適宜選
択される吸収促進剤との配合割合は、臨界的では
ないが、ウロキナーゼ100単位に対して高級脂肪
酸0.01〜２mg、特に好ましくは0.05〜0.5mg、ポリ
アルキレングリコール0.1〜５mg、特に好ましく
は0.1〜１mg、カルシウム0.0001〜0.1mg、特に好
ましくは0.0005〜0.005mgである。

本発明の組成物は常法に従つて経口または直腸
投与用に製剤化される。即ち、必要により炭酸カ
ルシウム、リン酸カルシウム、タルク、乳糖、デ
キストリン、でんぷんのような賦形剤、アラビア
ゴム、トラガント末のような結合剤、ラノリン、
ココナツツ油等を加えて錠剤、カプセル剤または
坐剤とする。なお、ウロキナーゼは胃液によつて
分解失活するので、常法に従つて上記錠剤または
カプセルに腸容皮、例えばヒドロキシプロピルメ
チルセルロースフタレートの膜を施すのが望まし
い。

１錠（カプセル、坐剤）中のウロキナーゼの含
量は、ウロキナーゼの投与量によつて適宜選択さ
れる。例えば、血栓治療のためには１日に少なく
とも10万〜50万単位投与されるので、１錠（カプ
セル、坐剤）中にウロキナーゼ３万〜12万単位を
含有させるのが望ましい。

次に、実施例および試験例を示して本発明をさ
らに詳しく説明する。

［実施例 １］ (1) 高級脂肪酸添加ウロキナーゼリポソーム粉末
の調製 レシチン32mg、コレステロール15.4mgおよびオ
レイン酸５mgをクロロホルム３mlに溶解し、50ml
容ナス型フラスコに入れた。これにイソプロピル
エーテル３mlを加え、撹拌混和した後、ウロキナ
ーゼ10000単位を含む水溶液１mlを加えた。得ら
れた混合液を水浴型超音波洗浄機の中で、４℃の
温度において５分間超音波処理することによつて
均一に分散させた。分散液から、40℃の温度にお
いて、ロータリーエバポレターを用いてゲルが生
成するまで溶媒を留去した。このゲルに生理食塩
水を５ml加え撹拌したのち、溶媒留去を更に10分
間継続し、リポソーム懸濁液を得た。この懸濁液
を100000Gで30分間遠心し、２度生理食塩水で洗
浄する。得られたペレツトを生理食塩水に懸濁さ
せ、除菌処理を行ない、ウロキナーゼリポソーム
懸濁液を得た。このウロキナーゼリポソーム懸濁
液を凍結乾燥し、粉末ウロキナーゼリポソームを
得た。

(2) 吸収促進剤の調製 オレイン酸35mgにHCO−60（ポリオキシエチレ
ン硬化ヒマシ油）0.5mgを加え、撹拌混和した後、
ポリエチレングリコール−6000 100mgを水５mlと
共に加え、激しく撹拌し、均一な分散液とした。
次いで、塩化カルシウム0.7mgを加え、溶解した
後、凍結乾燥することにより、粉末吸収促進剤を
得た。

(3) 本発明組成物の調製 （３−１） 上記(1)および(2)で調製された粉末
ウロキナーゼリポソーム（ウロキナーゼ６万単位
含有）と粉末吸収促進剤136mgを混合し、これに
適当量のポリエチレングリコール、デキストリン
を加えたものをゼラチンカプセルに充填した。こ
のカプセルに腸溶皮を施して製した。

（３−２） 上記(1)および(2)で調製された粉末
ウロキナーゼリポソーム（ウロキナーゼ３万単位
含有）と粉末吸収促進剤136mgを混合し、これに
適当量のデンプン、乳糖、ヒドロキシプロピルセ
ルロースを加えたものを打錠し、この錠剤に腸溶
皮を施して製した。

次いで、本発明の腸管吸収性ウロキナーゼ組成
物の効果を確認するため、下記の実験を行つた。

［実施例 １］ 薬効の持続性のラツトによる比較試験 実施例１の（３−１）に準じて調製した本発明
のウロキナーゼリポソーム組成物カプセル剤（た
だし、１カプセルのウロキナーゼ含有量は１万単
位）と市販の凍結乾燥剤を用いた。

実験には体重200〜250ｇのウイスター系雄性ラ
ツトを用い、それぞれ10000単位ずつを、本発明
のカプセル剤は胃内へ、市販製剤は胃内または静
脈内へ投与し、各時間毎に採血し、血中のα₂−Ｐ
（α₂−プラスミンインヒビター）活性を合成基
質Ｓ−2251を用いて測定した。

その結果を第１図に示す。市販製剤を胃内へ投
与した場合にはほとんど吸収されず、α₂−Ｐ活
性は低下しなかつた。また静脈内に投与した場合
には、急速な活性の低下が認められたが、速やか
に回復してしまい、持続性に欠けた。一方、本発
明のカプセル剤を投与した場合には、１時間後に
約60％まで低下し、６時間以上持続した。

［実験例 ２］ 薬効の持続性の犬による比較試験 実施例１の（３−１）に準じて調製した本発明
のウロキナーゼリポソーム組成物カプセル剤と市
販の凍結乾燥製剤を用いた。実験には体重９〜13
Kgの健康なビーグル犬を用い、それぞれ60000単
位ずつを、本発明のカプセル剤は十二指腸内へ、
市販製剤は十二指腸内または静脈内へ投与し、各
時間毎に採血し、血中のα₂−Ｐ（α₂−プラスミ
ンインヒビター）活性を合成基質Ｓ−2251を用い
て測定した。

その結果を第２図に示す。市販製剤を十二指腸
内へ投与した場合にはほとんど吸収されず、α₂−
Ｐ活性は低下しなかつた。また静脈内に投与し
た場合には、急速な活性の低下が認められたが、
速やかに回復してしまい、持続性に欠けた。一
方、本発明のカプセル剤を投与した場合には、１
時間後に最大65％まで低下し、10時間以上持続し
た。

なお、第１図および第２図において、○印線は
本発明を投与した場合、□印線は市販製剤を胃
（第１図）、十二指腸（第２図）に投与した場合、
△印線は市販製剤を静脈内に投与した場合を示
し、それぞれ10例の平均値で示されている。

発明の作用効果 本発明によれば、経腸投与可能な高級脂肪酸添
加ウロキナーゼリポソーム組成物が提供される。
ウロキナーゼは単独では腸管から殆ど吸収されな
いが、本発明では、高級脂肪酸添加ウロキナーゼ
リポソームに高級脂肪酸、ポリアルキレングリコ
ールおよびカルシウムから適宜選択された吸収促
進剤を配合することにより、ウロキナーゼの腸管
からの吸収が著しく高められる。

さらに本発明よれば、ウロキナーゼの薬効が持
続するウロキナーゼリポソーム組成物が提供され
る。ウロキナーゼは血液中において速やかに分解
されるため、従来の投与方法ではその薬効を長時
間持続させることは困難である。

しかるに、本発明の組成物においては、ウロキ
ナーゼは腸管から徐々に吸収されるため、血中の
ウロキナーゼ濃度を長時間にわたつて高く維持す
ることができ、薬効の持続化が達成される。

本発明で用いるウロキナーゼリポソームには、
その膜材中に所定量の高級脂肪酸が添加されてい
るため、吸収促進性がそれ自体優れているが、本
発明の組成物には、吸収促進剤も配合されている
ため、より一層効果は顕著となる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ラツトに、本発明の組成物を経胃投
与した場合、および、対照組成物を経胃または静
脈内投与した場合の血漿水α₂−Ｐ活性の変化を
示すグラフ、第２図は、犬に、本発明の組成物を
経腸投与した場合、および、対照組成物を経腸ま
たは静脈内投与した場合の血漿中α₂−Ｐ活性の
変化を示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ウロキナーゼを取り込んだリポソームおよび
   吸収促進剤からなり、該リポソームを構成する膜
   材は、脂質および少なくとも１種の高級脂肪酸を
   含有し、かつ、膜材中の高級脂肪酸配合量は５〜
   15wt％であることを特徴とする腸管吸収性ウロ
   キナーゼリポソーム組成物。 ２ 前記吸収促進剤がポリアルキレングリコー
   ル、カルシウムおよび高級脂肪酸から選択される
   １種以上である特許請求の範囲第１項に記載の腸
   管吸収性ウロキナーゼリポソーム組成物。 ３ 前記脂質が水素添加リン脂質である特許請求
   の範囲第１項または第２項に記載の腸管吸収性ウ
   ロキナーゼリポソーム組成物。